电泳时样品没有溢出到其他泳道，胶进行考马斯亮蓝染色后，各个泳道蛋白都连在一起了，而且泳道越来越宽，为什么呢？

连在一起是因为蛋白载量过高，如果原来是用15孔梳子，可以改用10孔梳子，增加泳道间距可以改善，否则最好减少上样量。双条带要么是蛋白有修饰化，或者是剪切带，降解带。

上样量太大了，蛋白向两边溢了。

考马斯亮蓝可能用的太多了，也可能是纯化有问题的，你可以洗脱后再用立春红试一下看看。