WB中转膜液为什么要添加甲醇呢，其作用又是什么

PVDF膜一定要在纯甲醇里浸润的！不然蛋白结合不上去。在100%甲醇里短暂浸润,其目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合。小分子及大分子量的蛋白转移时，多加或不加甲醇也是这个目的

甲醇可以促进转膜细胞膜中脂质分子的能量消解，使它们变为较脆的胶体，从而使细胞中的物质出现释放与膜上的穿梭。另外，它还可以促进细胞的膜合成，增加膜的稳定性，有助于控制膜的结构。受清洗和干燥的作用于促进细胞抵抗后续过程中等抗衰老效果。

在WB转膜过程中，Western转膜液中添加甲醇可以提高转膜效果。甲醇的作用主要体现在以下几个方面：

1. 增加溶解度：甲醇是一种有机溶剂，可以增加蛋白质在Western转膜液中的溶解度。这有助于蛋白质从凝胶中更快地溶解并转移到膜上。

2. 提高转膜效率：甲醇可以降低蛋白质与凝胶之间的结合力，从而促进蛋白质从凝胶中更快地释放出来，实现更有效的转移。

3. 优化蛋白结构：甲醇有助于维持蛋白质的三维结构，特别是在低温条件下，可以降低蛋白质的降解和变性。

4. 降低背景：甲醇可以与膜上的非特异性结合的杂质结合，从而降低背景信号，提高特异性信号的检测灵敏度。

5. 提高信号稳定性：在WB实验中，甲醇有助于稳定信号，减少实验过程中的信号损失。

甲醇的浓度和类型会影响转膜效果。通常，Western转膜液中添加的甲醇浓度为10%-20%。另外，无水的甲醇在WB实验中效果更佳，因为无水甲醇能更好地维持蛋白质结构，减少非特异性结合。

主要作用:甲醇可以促进转膜细胞膜中脂质分子的能量消解，使它们变为较脆的胶体，从而使细胞中的物质出现释放与膜上的穿梭。另外，它还可以促进细胞的膜合成，增加膜的稳定性，有助于控制膜的结构。受清洗和干燥的作用于促进细胞抵抗后续过程中等抗衰老效果。甲醇可以防止膜片的粘附,从而提高膜片的可操作性,减少膜片的损耗,提高膜片的使用寿命。