• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        agrin蛋白转膜的条件是啥啊?试了很多条件都不行

        user-title

        为啥不吃香菜香菜


        wx-share
        分享

        4 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        转膜条件80v,30min就可以将蛋白转印,最多不超过60min,只要marker成功转移到膜上,相应的分子量就转移过去了。

        user-title

        高山云初

        有帮助

        1. 膜的选择:选择合适的薄膜是进行大蛋白转膜的关键。常用的薄膜有聚乙烯膜(PE膜)、聚丙烯膜(PP膜)和聚偏氟乙烯膜(PVDF膜)等。不同的膜具有不同的特性,如耐酸碱性、耐高温等,根据实验需求选择合适的膜材料。

        2. 转膜缓冲液:转膜缓冲液的选择应根据目标蛋白的性质和转膜装置的要求来确定。常用的转膜缓冲液有Tris缓冲液、甘氨酸缓冲液等。转膜缓冲液的pH值和离子浓度应适当调整,以保证蛋白的稳定性和转移效果。

        3. 转膜电流:转膜电流的选择应根据目标蛋白的大小和转膜时间来确定。通常情况下,较小的蛋白分子需要较低的电流,较大的蛋白分子则需要较高的电流。转膜时间一般为1-2小时,过长的转膜时间可能导致蛋白的损失。

        4. 转膜时间:转膜时间的选择要根据蛋白的大小和转膜效果来确定。通常情况下,较小的蛋白分子转膜时间较短,较大的蛋白分子转膜时间较长。转膜时间过短可能导致蛋白未能完全转移到薄膜上,而过长的转膜时间则可能导致蛋白的损失。

        5. 转膜装置:转膜装置有多种选择,常用的有半湿式转膜装置和干式转膜装置。半湿式转膜装置适用于较小的蛋白分子,干式转膜装置适用于较大的蛋白分子。在使用转膜装置时,要注意装置的清洁和消毒,以避免杂质对蛋白转膜的影响。

        6. 转膜温度:转膜温度的选择要根据蛋白的稳定性和转膜效果来确定。一般情况下,较低的转膜温度有助于保持蛋白的活性和稳定性,但过低的温度可能导致转膜时间延长。较高的转膜温度可以加快转膜速度,但要注意不要超过蛋白的热稳定性范围。

        7. 转膜后处理:转膜后,可以对转膜膜进行染色、修剪和固定等处理。染色可以检测蛋白的转膜效果,修剪可以去除不需要的转膜区域,固定可以固定蛋白在薄膜上,防止后续操作中的蛋白流失。

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        对于分子量10-15kDa的指标转膜时间不宜过长,100V、冰浴45min;对于分子量指标150kDa以上的指标,100V、冰浴2h;其他介于15-150kDa之间的指标100V、冰浴1h。

        user-title

        周末也要努力呀

        有帮助

        使用300毫安1小时左右即可了

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序