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        大肠杆菌中菌上清液中高效液相色谱测天冬酰胺的含量

        相关实验:反相高效液相色谱

        user-title

        小可爱EQM3

        想知道流动相和进样量,波长,等等一系列实验步骤

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        2 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        1). 先对流动相进行过滤,根据需要选择不同的滤膜,般为有机系和水系,常用的孔径为0.20um和0.45um。

        2). 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。

        3). 正常情况下,仪器先用甲醇冲洗10-20分钟,然后再进入测试用流动相(如流动相为缓冲试剂,则要次重蒸水冲洗10-20分钟,直至色谱柱中有机相冲净为止) 。

        4). 般情况下,流动相冲洗20-30分钟后,仪器方可稳定,重要的是仪器基线走后,方可进样测试。

        5). 同时进两针标样,将其结果相比较,其结果的比值在0.98-1.02之间后,就可以正式进行样品的测试了。

        6). 样品测试结束后,就要进行色谱仪及色谱柱的清洗和维护。如流动相为缓冲试剂,同样也要用重蒸水清洗10-20分钟,方可用有机相进行保护,否则,有损色谱柱。

        7). 关机时,先关计算机,再关液相色谱。

        user-title

        高山云初

        有帮助

        方法参数设定:

        1、波长设定:

        检测器显示初始屏幕,在波长处于闪烁状态下,输入所需波长值,按 [Enter]键确认。

        2、灵敏度设定:

        按[func]键,灵敏度设定处于闪烁状态,用数字输入所需灵敏度值,按[Enter]键确认。

        3、流速设定

        泵显示初始屏幕,流速设定处于闪烁状态,用数字输入所需的流速(脱气时流速一般设为5.0ml/min,做样时流速一般设为1.0ml/min),按[Enter]键确认。

        使用操作:

        1、更换流动相:

         

        (1)将滤头放入流动相中;

         

        (2)打开泵的放空阀,流速设定处于闪烁状态,用数字输入所需流速(一般设为5.0ml/min),按[pump]键冲洗大约30s-1min左右,待气泡赶尽,再按[pump]键停止冲洗,关闭放空阀;

         

        (3)先用10%甲醇或乙腈水溶液用0.8-1.0ml/min流速冲洗色谱系统30min;(4)按[func]键,选定流速1.0ml/min,按[pump]键,冲洗柱子大约20-30min 左右。

         

        2、进样

         

        (1)进样前按检测器[zero]键调零;(2)用待进溶液清洗注射器,按质量标准要求抽取待进溶液适量(取样量一般为所用定量环的5倍以上,保证进样量大于定量环)并排除气泡后进样;如不能随时更换定量环时则需精密量取后进样。

         

        (3)击Run Single图标,键入方法名,文件名,保存途径。将进样针的样品溶液针头垂直朝上,用手指轻弹其外壁,将针内气泡赶出,进样阀在进样状态(INJECT)将微量进样器水平插入进样阀的导针孔,然后将进样阀手柄转到取样状态(LOAD),匀速平推注入样品,将进样阀手柄果断转到进样状态(INJECT)。软件上按“启动”。拔出微量进样器。记录图谱;

         

        (4)待样品检测完成后,先关闭检测器(D灯),更换流动相为10%甲醇或乙腈水溶液,冲洗色谱系统至少30min(如含盐或强酸或碱,至少冲洗60min)。再次更换流动相为纯甲醇冲洗系统30min左右以维护系统的清洁。

         

        (5)关闭工作站、电脑,检测器及泵的电源。

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