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        PCR拖尾及假阳性的原因及对策

        互联网

        14398

        一、拖尾

        现象:产物在凝胶上呈Smear状态。

        原因:

        1.模板不纯

        2.Buffer不合适

        3.退火温度偏低

        4.酶量过多

        5.dNTP、Mg2+浓度偏高

        6.循环次数过多

        对策:

        1.纯化模板

        2.更换Buffer

        3.适当提高退火温度

        4.适量用酶

        5.适当降低dNTP和镁离子的浓度

        6.减少循环次数

        二、假阳性

        现象:空白对照出现目的扩增产物

        原因:

        靶序列或扩增产物的交叉污染

        对策:

        1.操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外;

        2.除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管

        及加样枪头等均应一次性使用。

        3.各种试剂最好先进行分装,然后低温贮

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