菌液PCR全假阳性,咋回事
嘻哈哈哈321
请教问题：我从真菌中提取DNA，并PCR后进行纯化，纯化产物和007载体连接并转感受态，挑取单克隆摇菌液，并进行菌液PCR，一切正常，然后菌液送测序。可是测序结果返回全是假阳性。不晓得问题出在哪里了，请教各位，谢谢！
4 个回答
cab2
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可以先用cracking液裂解细菌，然后菌液跑胶看质粒大小
天一湖医者
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引物设计不合适：选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性，因而在进行 PCR 扩增时，扩增出的 PCR 产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短，容易出现假阳性。需重新设计引物。
bamboopiggy
有帮助
可能你的目的片段和你的载体并没有连接到一起，只是转入了大肠杆菌，然后你用插入片段的引物p能p出条带来，你试试用载体的引物p，看看有没有条带
whilt-shirt
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有可能是提取DNA过程中出现了污染
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