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        PCR拖尾及假阳性的原因及对策

        互联网

        4810

         

        拖尾

          现象 :产物在凝胶上呈Smear状态。

          原因

          1.模板不纯

          2.Buffer不合适

          3.退火温度偏低

          4.酶量过多

          5.dNTP、Mg2+浓度偏高

          6.循环次数过多

          对策

          1.纯化模板

          2.更换Buffer

          3.适当提高退火温度

          4.适量用酶

          5.适当降低dNTP和镁离子的浓度

          6.减少循环次数 

        假阳性

          现象 :空白对照出现目的扩增产物

          原因

          靶序列或扩增产物的交叉污染

          对策

          1.操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外;

          2.除酶及不能耐高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管

          及加样枪头等均应一次性使用。

          3.各种试剂最好先进行分装,然后低温贮存

         

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