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        wb实验中,小分子蛋白跑不出来的原因及对策?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

        最新修订时间:

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        合作专家 | 刘建敏博士

        病理学与病理生理 中国科学院大学

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        审核专家 | 聂壹峰博士

        纳米生物医学 中国科学院大学

        材料与仪器

        蛋白样品、PVDF 膜

        步骤

        1、蛋白降解;对策:于冰上提取,buffer 里加蛋白酶抑制剂防止降解。

        2、样品保存不当;对策:提取后尽快测定浓度,并煮沸变性,未煮沸样品保存置于 -80 ℃ 保存。

        3、胶浓度较低,容易跑过头;对策:换用浓度较高的胶,例如 15% 或者用梯度胶。

        4、转膜时间太长,小分子蛋白转过头;对策:减少转膜时间,可尝试 200-250 mA 转 15-30 min 左右。

        5、膜孔径太大;对策:换用小孔径如 0.2 μm 的 PVDF 膜。

        6、running buffer 不合适;对策:换用 Tricine-Glycine。

        7、抗体特异性不佳或失效等其他原因;对策:参考文献选择合适的抗体更换。

        来源:丁香实验

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