- ￥650
- TIANGEN
- VT402
- 中国
- 2025年12月31日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
天根生化科技（北京）有限公司
- 规格：
20 μl
pGM-T是高效克隆 PCR 产物的专用载体，由克隆载体改建而成，使多克隆位点两侧的 3’端带 T。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在 PCR产物的 3’端添加一个 A，可与 pGM-T 载体 3’端的T互补连接，同时 3’T突出端可以防止载体的自身环化，因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。pGM-T载体包含有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，其侧端和多克隆位点区相接，多克隆位点区位于β半乳糖苷酶的α肽编码区内。α肽插入失活使得菌落在指示培养基中呈现不同颜色，可根据颜色直接筛选重组克隆，白色克隆为阳性重组克隆，蓝色的为载体自连的克隆 (具体筛选原理见分子克隆第三版)。
克隆实验需自备IPTG、X-Gal、二甲基甲酰胺
注：M13 Reverse Sequencing binding site 176-197 M13 Forward Sequencing binding site 2949-2972
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文献和实验[1] Li X, Huang C, You Q, et al. Rhizobium-Enhanced Drought Tolerance in Red Kidney Beans Through Modification of Transcriptome and Microbial Communities[J]. Microorganisms, 2025, 13(9): 2153.
[2] Li S, Jing T, Zhu F, et al. Genetic analysis of Orf virus (ORFV) strains isolated from goats in China: insights into epidemiological characteristics and evolutionary patterns[J]. Virus Research, 2023, 334: 199160.
/GATCY) 这几个酶切产物粘端突出部分都一样是 5’GATC，能互补，可以相互连接。此外，所有平末端酶切产物都可以相互拼接，只是连接效率低些。要是运气再背点、酶切粘端怎么都不配对？用 Klenow 大片段或者T4聚合酶或“削平”或“补齐”得到平末端，再“强行连接”。。。这种目标片段前后都是平端的、或者单酶切的，载体“自恋”（自我连接）还可以用大小区分，目标片段可能正向接入或者倒装，如何在筛选时进行区分，又多了一个麻烦事儿。要是用到甲基化敏感的内切酶，比如 HPhI（对 Dam、Dcm 甲基化敏感
一、Lighteningssembly Cloning Kit 传统克隆方法：引物设计合成、PCR、连入克隆载体、酶切获得插入片段，酶切获得线性载体，连接获得重组质粒。需酶切，引物设计受酶切位点限制；需连入克隆载体；步骤多，耗时长；效率低。 北京康碧泉公司代理的Gene-Foci试剂盒的克隆方法：引物设计合成、PCR获得插入片段，PCR或酶切获得线性载体，连接获得重组质粒。无需酶切，引物设计不受酶切位点限制；无需连入克隆载体；步骤少，速度快；高连接效率，高阳性克隆
，能够以模版为准切掉错配的碱基，因而得到的PCR产物多数是平末端，不能用T载体克隆。通常需用目的载体多克隆位点上的平末端单酶切位点，单酶切得到平末端的线性片断，直接连接PCR产物。这类酶得到的产物通常不能用TA克隆试剂盒。目前也有商业化的平末端PCR产物克隆试剂盒，不过较少用。平末端的连接效率低，通常需要高浓度的连接酶，较长的连接时间，合适的片断：载体比例，有的时候还需要调整反应体系的ATP浓度或者增加聚乙二醇（PEG2000），以得到较高的连接效率。许多厂家都有推出快速连接试剂盒
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