- ￥500 - 1300
- TIANGEN
- VT302
- 中国
- 2025年12月29日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 供应商：
天根生化科技（北京）有限公司
- 规格：
10 μl×20 rxn/10 μl×60 rxn
| 规格： | 10 μl×20 rxn | 产品价格： | ￥500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 10 μl×60 rxn | 产品价格： | ￥1300.0 |
pGM-T是高效克隆 PCR 产物的专用载体，由克隆载体改建而成，使多克隆位点两侧的 3’端带 T。由于大部分耐热聚合酶反应时都会在 PCR产物的 3’端添加一个 A，可与 pGM-T 载体 3’端的T互补连接，同时 3’T突出端可以防止载体的自身环化，因此可大大提高PCR产物的连接和克隆效率。pGM-T载体包含有T7和SP6 RNA聚合酶启动子，其侧端和多克隆位点区相接，多克隆位点区位于β半乳糖苷酶的α肽编码区内。α肽插入失活使得菌落在指示培养基中呈现不同颜色，可根据颜色直接筛选重组克隆，白色克隆为阳性重组克隆，蓝色的为载体自连的克隆 (具体筛选原理见分子克隆第三版)。
克隆实验需自备IPTG、X-Gal、二甲基甲酰胺
注：M13 Reverse Sequencing binding site 176-197 M13 Forward Sequencing binding site 2949-2972
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文献和实验[1] Li W, Wang X, Xu X, et al. Identification of the Bovine CSN3 Core Promoter Region and the Relationships Between CSN3 Promoter Polymorphisms and the CSN3 A and B Alleles[J]. Animals, 2025, 15(2): 134.
[2] Zhang Y, Zou M, Lodhi A F, et al. Microbial degradation and community structure analysis of hydroxyl-terminated polybutadiene (HTPB)[J]. AMB Express, 2021, 11(1): 180.
[3] Li W, Wang X, Wu P, et al. Polymorphism of the CSN3 3’UTR in Dairy Cows Causes Changes in bta-miR-708 Binding Ability and κ-Casein Expression[J]. Animals: an Open Access Journal from MDPI, 2024, 14(23): 3462.
。） 使用不同的聚合酶 通常用于体外转录的三种 RNA 聚合酶可以相互不同地转录给定的模板。当转录不能完成时，可以充分利用这种转录给定模板序列的不同能力。改变转录模板前面的聚合酶启动子序列是一种劳动密集型修复，因为它可能需要设计 PCR 引物或亚克隆。Ambion 具有可简化过程的载体和引物。pTRIPLEscript 系列载体具有串联排列的 SP6、T7 和 T3 启动子，这些载体特别适用于亚克隆转录模板。或者，Ambion 的无克隆启动子添加试剂盒 Lig'nScribe 可用于改变可 PCR 扩增
及洗脱等多个环节相关。可以从以下几个角度进行优化： ①选择合适的琼脂糖凝胶浓度：100-500bp 用 2%，500-2000bp 用 1.5%，2000-10000bp 用 1%，确保 DNA 条带清晰且易于释放。 ②避免长时间紫外照射：尽量使用 302nm 长波长紫外灯，从切胶到放入溶胶 buffer 控制在 30 秒，也可选择蓝光染料及蓝光切胶仪。 ③溶胶要彻底：严格按试剂盒比例添加溶胶 buffer，随后 50-60℃ 水浴加热溶胶，期间每隔 2-3 分钟颠倒混匀一次，直至胶块完全溶解。 ④
产物不能连接。PCR 产物已经插入，但未破坏lacZ 基因的翻译框。问题：插入片段：载体连接比例不理想。可能的原因：连接的PCR 片段中可能有引物二聚体。PCR 反应扩增的多种产物克隆到pGM-T Easy或pBS-T载体中。建议：DNA 重排 检测大量克隆观察重排是否是随机的。如果是随机重排，通过筛选可得到有目的DNA 片段的克隆菌，而如果所有克隆是一种重排方式，则需要使用修补缺陷的菌株保护插入片段，减少重排事件的发生。问题：PCR 连接反应只产生白色克隆（没有蓝色克隆）可能的原因：氨苄失活
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