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- TIANGEN
- 北京
- VT206
- 2026年01月13日
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- 技术资料
- 保存条件：
-30~-15℃
- 保质期：
1 年
- 英文名：
Lethal Based Simple Fast Cloning Kit
- 库存：
大量
- 供应商：
天根生化科技（北京）有限公司
- 规格：
20次
pLB 零背景快速克隆试剂盒是一种阳性选择克隆系统。试剂盒提供一种新颖的即用型阳性选择克隆载体 pLB，该载体含有致死基因，多克隆位点处插入外源片段会导致该基因失活，而自身环化的 pLB 载体则会表达致死的毒性蛋白。因此，转化后只有含有重组质粒的细菌才能存活形成克隆菌落，从而无需蓝白斑筛选。克隆位点两端均包含Bgl Ⅱ酶切位点，可进行单酶切鉴定阳性克隆。
■ 方便：自连致死的零背景载体，无需蓝白斑筛选
■ 快速：独特连接体系，5 分钟快速连接≤ 3 kb 片段
■ 高效：菌落数多，阳性率接近100%
■ 灵敏：可实现浓度低至 0.05 pmol 及长至 8 kb 片段的高效连接
■ 普适：包含高效平端化酶，平 / 粘末端产物均可连接
感受态细胞，氨苄青霉素
连接不同大小片段的阳性率检测。700 bp 片段加入量为12.5 ng，2 kb 片段加入量为23 ng，4 kb 片段加入量为100 ng，8 kb 片段加入量为300 ng。
M: TIANGEN Marker III
平末端长片段连接菌落数。连接体系中，载体加入1 μl(35 ng)，片段与载体的摩尔比7:1。≤ 3 kb 片段，室温(22℃ ) 连接5min；＞ 3 kb 片段，室温(22℃) 连接30 min。* 百分数代表菌斑检测的阳性率。
粘末端低浓度片段连接菌落数。连接体系中，700 bp 片段加入量12.5 ng，2 kb 片段加入量23 ng，片段与载体的摩尔比1:1，室温(22 ℃ )连接5 min。* 百分数代表菌斑检测的阳性率。
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文献和实验[1] Liu X, Xu Y, Di J, et al. The triterpenoid saponin content difference is associated with the two type oxidosqualene cyclase gene copy numbers of Pulsatilla chinensis and Pulsatilla cernua[J]. Frontiers in Plant Science, 2023, 14: 1144738.
[2] Zhu F, Ye Q, Chen H, et al. Multigene editing reveals that MtCEP1/2/12 redundantly control lateral root and nodule number in Medicago truncatula[J]. Journal of experimental botany, 2021, 72(10): 3661-3676.
[3] Xu P, Li X, Fan J, et al. An arginine-to-histidine mutation in flavanone-3-hydroxylase results in pink strawberry fruits[J]. Plant Physiology, 2023, 193(3): 1849-1865.
后都只是平端产物。这种平端克隆往往效率低，并且有非特异性背景菌落产生，造成筛选困难。Topo平端克隆主要改良载体设计，把ccdB （Control of cell death）基因并入到mcs中，如果没有DNA片断插入，ccdB基因则会表达，ccdB基因的表达蛋白，会破坏细菌的DNA gyrase，造成细菌染色体的降解导致细菌死亡。如果有插入片断，则ccdB基因表达受到阻碍，所以细胞可生长。这样可以把高背景的缺点改善，节省筛选的时间。Topo平端克隆与Topo TA方法一样，操作简单快速。Zero
PCR Cloning Kit）（Topo XL PCR Cloning Kit） 因为越来越多高确限度热稳定酶如Pfx、Pfu被用于PCR 扩增，使到PCR 后都只是平端产物。这种平端克隆 往往效率低，并且有非特异性背景菌落产生，造成筛选困难。 Topo平端克隆 主要改良载体设计，把ccdB （Control of cell death）基因并入到mcs中，如果没有DNA片断插入，ccdB基因则会表达
产生，造成筛选困难。 Topo平端克隆主要改良载体设计，把ccdB （Control of cell death）基因并入到mcs中，如果没有DNA片断插入，ccdB基因则会表达，ccdB基因的表达蛋白，会破坏细菌的DNA gyrase，造成细菌染色体的降解导致细菌死亡。如果有插入片断，则ccdB基因表达受到阻碍，所以细胞可生长。这样可以把高背景的缺点改善，节省筛选的时间。Topo平端克隆与Topo TA方法一样，操作简单快速。 平端PCR克隆方法（Zero Blunt
