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pLB零背景快速克隆试剂盒(VT205)

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  • 中国
  • VT205
  • 2026年01月13日
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      天根生化科技(北京)有限公司

    • 规格

      10 μl×20 rxn

    pLB 零背景快速克隆试剂盒是一种阳性选择克隆系统。试剂盒提供一种新颖的即用型阳性选择克隆载体 pLB,该载体含有致死基因,多克隆位点处插入外源片段会导致该基因失活,而自身环化的 pLB 载体则会表达致死的毒性蛋白。因此,转化后只有含有重组质粒的细菌才能存活形成克隆菌落,从而无需蓝白斑筛选。克隆位点两端均包含Bgl Ⅱ酶切位点,可进行单酶切鉴定阳性克隆。

    产品特点

    ■ 方便:自连致死的零背景载体,无需蓝白斑筛选

    ■ 快速:独特连接体系,5 分钟快速连接≤ 3 kb 片段

    ■ 高效:菌落数多,阳性率接近100%

    ■ 灵敏:可实现浓度低至 0.05 pmol 及长至 8 kb 片段的高效连接

    ■ 普适:包含高效平端化酶,平 / 粘末端产物均可连接

    自备试剂

    感受态细胞

    克隆位点图谱
    产品细节图片1
    平/ 粘末端连接流程
    产品细节图片2
    实验结果
    产品细节图片3

    不同长度片段连接菌液检测结果图

    连接不同大小片段的阳性率检测。700 bp 片段加入量为12.5 ng,2 kb 片段加入量为23 ng,4 kb 片段加入量为100 ng,8 kb 片段加入量为300 ng。

    M: TIANGEN Marker III

     

    产品细节图片4

    平末端长片段连接——菌落数

    平末端长片段连接菌落数。连接体系中,载体加入1 μl(35 ng),片段与载体的摩尔比7:1。≤ 3 kb 片段,室温(22℃ ) 连接5 min;> 3 kb片段,室温(22℃ ) 连接30 min。* 百分数代表菌斑检测的阳性率。

    产品细节图片5

    粘末端 低浓度片段连接——菌落数

    粘末端低浓度片段连接菌落数。连接体系中,700 bp 片段加入量12.5 ng,2 kb 片段加入量23 ng,片段与载体的摩尔比1:1,室温(22 ℃ )连接5 min。* 百分数代表菌斑检测的阳性率。

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    图标文献和实验
    相关实验
    • 双荧光素酶报告基因测试

      在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ,通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不够便利。因为各自的测试化学,处理要求,检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL载体系统,表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶,在单管中进行双荧光素酶报告基因测试,快速,灵敏,简便。系统还提供PLB裂解液,用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞,不需操作单个样品

    • PCR产物克隆(10)

      后都只是平端产物。这种平端克隆往往效率低,并且有非特异性背景菌落产生,造成筛选困难。Topo平端克隆主要改良载体设计,把ccdB (Control of cell death)基因并入到mcs中,如果没有DNA片断插入,ccdB基因则会表达,ccdB基因的表达蛋白,会破坏细菌的DNA gyrase,造成细菌染色体的降解导致细菌死亡。如果有插入片断,则ccdB基因表达受到阻碍,所以细胞可生长。这样可以把高背景的缺点改善,节省筛选的时间。Topo平端克隆与Topo TA方法一样,操作简单快速。Zero

    • RACE技术的原理和操作

      近年来随着生物技术的不断发展,出现了许多克隆新基因的方法和手段,如图谱克隆技术、转座子标签技术、mRNA差异显示技术二基因组减法技术以及cDNA文库筛选技术等。但上述方法人多具有实验周期长、技术步骤烦琐且工作量大等特点。cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)是一种基于PCR从低丰度的转录本中快速扩增cDNA的5'和3'末端的有效方法,以其简单、快速、廉价等优势而受到越来越多的重视。(相关阅读:精华vol 687

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