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天根生化科技(北京)有限公司
- 规格:
20次(VT202-01)/60次(VT202-02)
| 规格: | 20次(VT202-01) | 产品价格: | ¥390.0 |
|---|---|---|---|
| 规格: | 60次(VT202-02) | 产品价格: | ¥980.0 |


注:M13 Reverse Sequencing binding site 176-197 M13 Forward Sequencing binding site 2949-2972
| 产品名称 | 目录号 | 规格 | 目录价 |
| pGM-T连接试剂盒 | VT202-01 | 10 μl×20 rxn | 390元 |
| VT202-02 | 10 μl×60 rxn | 980元 | |
| pGM-T产物克隆试剂盒 | VT302-01 | 10 μl×20 rxn | 500元 |
| VT302-02 | 10 μl×60 rxn | 1300元 | |
| pGM-T平末端加A克隆试剂盒 | VT402 | 20 μl | 650元 |
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- 内容
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文献和实验[1] Fu J J, Mei Z Q, Tania M, et al. Development of RAPD-SCAR markers for different Ganoderma species authentication by improved RAPD amplification and molecular cloning[J]. Genetics and Molecular Research, 2015, 14(2): 5667-5676.
[2] Cheng J L, Yin Z C, Mei Z Q, et al. Development and significance of SCAR marker QG12-5 for Canarium album (Lour.) Raeusch by molecular cloning from improved RAPD amplification[J]. Genet Mol Res, 2016, 15.
[3] Huang Z, Titus T, Postlethwait J H, et al. Eye degeneration and loss of otx5b expression in the cavefish Sinocyclocheilus tileihornes[J]. Journal of molecular evolution, 2019, 87(7): 199-208.
【交流】关于NEB的T4 DNA连接酶和快速连接试剂盒的常见问题及解答
连接酶,反应10分钟。平滑末端连接:在20µl反应体系中加入1µl T4 DNA 连接酶反应2小时,或者加入1µl高浓度T4 DNA 连接酶反应10分钟。 另外,NEB的快速连接试剂盒 (Quick Ligation Kit, NEB #M2200V [15个反应])是独有的可以在室温5分钟条件下连接平滑末端和粘性末端的试剂盒。 图1:在25°C条件下,用1 unit(1:400稀释后取1 µl)T4 DNA连接酶连接λDNA/Hind Ⅲ片段(4-碱基粘端)不同反应时间的结果。 图
/µg DNA),则是连接反应存在问题 如果使用1×109 cfu/µg DNA 的感受态细胞,用试剂盒中的阳性对照进行连接实验, 白色菌落的比例应为70-90%。如连接反应没有优化或失败,虽然转化的总克隆菌数很高(≥1×109 cfu/µg DNA 感受态细胞可获得高至300 个菌落),但白色菌落很少或没有。参见以上“连接反应存在问题”中的建议对策 。问题:采用插入对照DNA片段,连接转化时白色克隆菌数低于60%。可能的原因:10×快速连接缓冲液稀释不当,提供的T4 连接酶缓冲液为十倍浓度,10
等。 PCR 产物 两种方式:一种纯化后直接酶切连接;一种连 T 载体再往下切连接。我个人强烈建议第二种,连 T 载体。因为 PCR 产物直接酶切我觉得有两个缺点:①由于两头把手太短,虽说有保护碱基,但我觉得还是不如从质粒上往下切好切,而且容易切坏、切碎;②无法从电泳上看出来切没切开,因为也就切下了几个十几个 bp,带形没啥变化。连 T 载体的优点:①进载体后,大提一次的质粒夸张点说够用一辈子的,再说 PCR 那东西还不太稳定,一把多一把少的。②酶切会很清晰,切下来了就是有带,没切动












