登录
搜索
提问
我要登录
｜免费注册
首页
>
实验专题
>
质粒构建及提取宝典
质粒构建及提取宝典
34 内容 25 订阅
收藏订阅
实验方法
热门视频
相关问答
推荐阅读
问
一个质粒更换，其他质粒的启动子过来，需要考虑哪些因素。
huarenqiang5
主要考虑启动子的相关因素： 诱导型启动子通常比较强，这类启动子受到外界条件诱导后开始工作。启动子的强弱主要跟其与RNA聚合酶相互作用的强弱或者RNA聚合酶量的多少有关系。 强启动子常常直接或间接影响着RNA聚合酶的产量。
2 回答
1107 围观
问
质粒提取曲线不对
loveliufudan
可能有以下几个原因： 1. 污染：试剂盒中的试剂或试样可能受到污染，导致曲线异常。确保在操作过程中避免污染源的引入，并且按照试剂盒说明书的要求进行操作。 2. 样品质量：样品中可能存在其他物质，如蛋白质、RNA、酶或其他杂质，这些物质可能会影响吸光度测量结果。尽量减少样品中的污染物，如通过正确的离心步骤去除细胞残渣。 3. 溶液pH值：质粒提取试剂盒中使用的缓冲液的pH值可能会影响吸光度测量结果。
2 回答
582 围观
问
转染两个重链质粒进细胞会怎样？
Eason老歌迷
两种质粒混了没有影响。利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在，两种质粒混了没有影响，只是不相容。利用同一复制系统的不同质粒不能在同一宿主细胞中共同存在，当两种质粒同时导入同一细胞时，它们在复制及随后分配到子细胞的过程中彼此竞争。在一些细胞中，一种质粒占优势，而在另一些细胞中另一种质粒却占上风。当细胞生长几代后，占少数的质粒将会丢失，因而在细胞后代中只有两种质粒的一种，这种现象称质粒
1 回答
781 围观
问
质粒怎么都提不出来，该用哪种方法？
琴琴小贝
分支杆菌中的质粒提取：采用经典的碱裂解法。取4.5 mlEP管一支，加0.5 ml菌液，加入1 ml溶液1（15％蔗糖、25 mMTriscl pH8.0、10 mMEDTA pH8.0)，隔时加入溶菌酶，终浓度10 mg/ml，小心混匀。置于0度冰浴30 min，加入2 ml溶菌液2（0.2NNao 1%SDS）,0度冰浴10 min，加1.5 ml 3M NaAC小心混匀。1 000 rpm离
1 回答
3441 围观
问
质粒构建中，怎么在质粒上给基因加A尾？
迟C迟
平末端DNA加A的步骤一般是先纯化PCR产物，加入dATP Buffer，利用Taq 酶在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接TA克隆。
6 回答
6309 围观
问
双酶切之后，为什么线性化质粒比环状质粒跑得快？
bamboopiggy
如果是完整质粒，应该是超螺旋的，跑的最快。但是感觉你这个lane像是开环带，就是双链dna有一条断开了，拖着尾巴，跑的慢。lane2 是线性带，跑的比开环带要快。
5 回答
32983 围观
问
小提质粒浓度太低，还是质粒丢失
huarenqiang5
你这个考虑是中和液吹吸次数太多引起DNA断裂所致。
3 回答
572 围观
问
农杆菌可以提质粒吗？
天一湖医者
农杆菌可以提质粒。和从大肠杆菌中的一样，260/280应在2.0左右。260/230应该大于2。
3 回答
7645 围观
问
构建质粒时，什么标签可以防止包涵体的形成？
bamboopiggy
重组基因在表达宿主中表达量过高或合成速度过快，以至于没有足够的时间进行折叠，二硫键不能正确配对，导致蛋白以包涵体的形式存在。所以你要调整你摇菌的速度和温度
2 回答
456 围观
问
实验欲获得某一确定的质粒，请问接下来该如何做？
我是金博士
个人觉得实验目的是要获得质粒，那么将产品洗脱之后，还有电泳跑胶，然后切胶之后纯化，再转化到相应菌种里面去。
2 回答
1048 围观
问
用质粒做qPCR的时候，低浓度的不同稀释倍数质粒（1undefined4-1undefined1copies/ul）CT值结果很接近，是质粒稀释的问题吗？要
土井挞克树
考虑质粒本身浓度太低，所以稀释后ct值拉不开，很接近。
4 回答
1530 围观
问
质粒提取失败怎么办？
huarenqiang5
可以从以下几方面试试：1、重新挑选新菌落进行液体培养；2、更换具有相同功能的高拷贝数载体；3、不要频繁转接，每次接种时应接种单菌落；4、可加大菌体用量并加倍使用溶液P1、P2和P3，可以有助于增加质粒提取量和提高质粒质量；5、可适当加温或延长溶解时间漂洗液洗涤后应离心尽量去除残留液体，再加入洗脱缓冲液；6、洗脱时放置1分钟可达到较好的效果。
3 回答
892 围观
问
质粒浓度低
bamboopiggy
你这50ml不会是在50ml管里，封死管口直接摇的吧？感觉是你菌量不够
3 回答
1531 围观
问
如何设计上下游引物引物，然后提质粒，并把目的基因转染到质粒里?
汤姆卜丽波
根据你目的基因的序列设计引物然后扩增，通过酶切连接，合成重组质粒
3 回答
622 围观
问
如何设计质粒 求求各位大佬帮忙
sswei
采用重组酶构建质粒方法1. 载体的制备一般推荐双酶切线性化，线性化完全，假阳性克隆低。酶切体系。2. 对于使用重组方式连接来说，PCR 要设计引物, 设计引物时要根据质粒载体和基因序列选择合适的同源序列，通过 PCR 扩增方式进行连接，PCR 的产物要纯化。引物设计原则简单总结一下：（1）前向引物：5’ 端--上游克隆载体末端同源序列+基因正向扩增引物--3’ 端（2）反向引物：3’ 端--基因反
3 回答
551 围观
问
菌种保种太长回影响质粒吗？
府宅
菌体老化死亡会发生菌体自溶,1.会影响质粒产出率,2.菌体自溶后可能会有小片段的基因组DNA污染提取的质粒.
3 回答
513 围观
问
请问，一个质粒里有2个CMV启动子，那它后面的基因都可以表达吗？
bamboopiggy
对都会表达，但是我感觉其中一个的cmv启动子可能在抗性基因上。
2 回答
970 围观
问
抽提的质粒DNA电泳时怎么出现基因组DNA的污染？
bamboopiggy
加buffer2 裂解大肠杆菌的时候，操作轻柔，一定按照kit的说明书给的时间，及时加入buffer3，终止裂解。否则就会出现genomic DNA的污染。
2 回答
1330 围观
问
质粒构建相关问题
Eason老歌迷
无外乎2个关键点：1.载体和片段，载体在进行酶切时要切干净，做对照，单切一定要cip，不然切的好也是白搭；做连接转化时要做自连对照，看下转化子和自连的菌落数大概心里就有个概念连上没连上了；连接片段是酶切得来就可以直接连，把胶回收产物再跑个胶看看，有时候我觉得光测不是特别准，一般片段不会有特别大问题；2.连接体系，个人觉得一次连接那么费时间，可以适当拉开比例做几个连接，然后一起进行转化。
3 回答
553 围观
问
纯化质粒降解的相关问题？
dxy_n4jex0k8
会不会是溶化质粒的时候没有放冰上？溶得太快且高浓度质粒互相撞击影响质量？如果长时间，比如几年，可以把质粒转进去菌里面，然后-80保存，后期复苏也更方便。
6 回答
3215 围观
1
2
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
实验小助手
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序
