• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        质粒怎么都提不出来,该用哪种方法?

        相关实验:质粒 DNA 提取实验

        user-title

        美少女金

        最近从国外要了一个大肠和分支杆菌的穿梭质粒,先转大肠杆菌保存,然后提取质粒没问题,然后转进分枝杆菌,可以筛选得到转化子,但是用碱法提质粒确提不出来,也试过用溶菌酶作用,都不行。发信给作者,证明这个质粒非整合性质粒,但拷贝数较低,采用大量提取也不行,而且每次都会把染色体DNA提出来,现在不知道怎么办?不知哪位能给出一个快速鉴定的好办法?
        wx-share
        分享

        1 个回答

        user-title

        琴琴小贝

        有帮助
        分支杆菌中的质粒提取:采用经典的碱裂解法。取4.5 mlEP管一支,加0.5 ml菌液,加入1 ml溶液1(15%蔗糖、25 mMTriscl pH8.0、10 mMEDTA pH8.0),隔时加入溶菌酶,终浓度10 mg/ml,小心混匀。置于0度冰浴30 min,加入2 ml溶菌液2(0.2NNao 1%SDS),0度冰浴10 min,加1.5 ml 3M NaAC小心混匀。1 000 rpm离心10 min,取上清转至另一EP管终,加入0.6倍体积异丙醇,置-20度过夜。15 000 rpm离心15 min,小心弃上清液,管底沉淀用70%乙醇洗两次,凉干。加入适量TE缓冲液融解。查到文献一篇,可供参考:(不好意思,文献太大不好上传,你上中国期刊网查一下篇名为《分枝杆菌质粒的提取》94年 中国微生态学杂志)另外,曲拉通X-100是属于非离子型表面活性剂。
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序