• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        质粒构建中,怎么在质粒上给基因加A尾?

        相关实验:质粒构建技术

        user-title

        dxy_j7jezao0

        wx-share
        分享

        6 个回答

        user-title

        迟C迟

        有帮助

        平末端DNA加A的步骤一般是先纯化PCR产物,加入dATP Buffer,利用Taq 酶在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接TA克隆。

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        用 T载体,先连然后再酶切连到你需要的载体上

        user-title

        Eason老歌迷

        有帮助

        有平末端连接试剂盒或者加A试剂液,购买即可,相当方便

        user-title

        bamboopiggy

        有帮助

        有两种方法,看你用的是什么酶:(1)使用不同的Taq酶,在PCR扩增循环结束后,加上72℃ 10分钟一个过程,Taq酶可以在扩增产物的3末端加上A(2)使用高保真的DNA聚合酶,如pfu酶,由于其不能在扩增产物的3末端加上A,得到的DNA序列为钝端,因此,需要在回收纯化后进行加A的过程,通常是以PCR回收产物为模板,加上一定量的普通Taq酶和反应液,加入dATP(或dNTP), 72℃ 10分钟

        user-title

        未来9

        有帮助

        有两种平末端DNA加A尾方法,一种是切胶回收后加,另一种是直接加在PCR产物中

        user-title

        天一湖医者

        有帮助

        1.保守法,先对平末端PCR产物纯化后,浓度要求至少20ng/ ul(大概就好,跑胶图像条带清晰,明亮),取14.5 ul PCR产物,加入2 ul Taq Buffer,3ul dNTP,0.5 ul Taq酶,在72度反应10~20min, 后直接回收纯化加A尾的DNA片段可用于TA克隆,此方法操作容易,成功率高;

        2.快速法,高保真酶PCR后的管子(体系为50ul)不用先纯化直接加入3ul dNTP 和0.5 ul Taq酶继续72度反应10~20min,此后直接回收或跑胶回收纯化加A尾的DNA片段可用于TA克隆,此方法操作步骤较少和方便,节省实验时间和实验经费。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序