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        用质粒做qPCR的时候,低浓度的不同稀释倍数质粒(1undefined4-1undefined1copies/ul)CT值结果很接近,是质粒稀释的问题吗?要

        相关实验:实时荧光定量 PCR(realtime PCR)

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        实验室小助理夏奇

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        4 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        考虑质粒本身浓度太低,所以稀释后ct值拉不开,很接近。

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        根据您提供的信息,释放的质粒浓度为10^4-10^1 copies/ul,但是CT值结果很接近。这种情况下,CT值结果接近的原因可能有多种可能,其中质粒稀释可能是其中之一。

        质粒稀释是常见的PCR反应问题之一,质粒稀释不均匀或过于稀释可能会导致PCR反应结果不准确。因此,为了获得准确的结果,应当确保质粒稀释均匀并且浓度适当。建议您重新检查质粒的浓度和稀释倍数,确保样品的合适稀释倍数和质量。此外,还需要检查PCR反应条件和反应体系,以确定是否存在其他因素影响PCR反应结果。

        总的来说,CT值接近可能是多种因素的结果,您需要仔细检查所有实验步骤和条件,以确定原因并解决问题。

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        首先要明确一下是否能以质粒来做qPCR,一般是以cDNA为模板,其次如果是质粒的话,可以多稀释几个梯度

        user-title

        伯乐生命医学产品

        有帮助

        这个范围的质粒浓度已经偏低,尤其10~3次方以下的浓度,本身ct值更大了,加样误差会更明显,可以尽量选择总体积>30ul的大体系的连续稀释法,充分混匀,另外可以选择专门用于稀释质粒的试剂进行稀释减少吸附等误差,以及要做复孔。另外 要关注NTC孔是否也有扩增,如果有,也会影响低浓度质粒的曲线ct值接近,不成梯度。

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