丁香通
丁香园
论坛
医药招聘
丁香医生
更多
调查派
用药助手
丁香搜索
医药数据库
来问医生
我要登录
|
免费注册
|
我的丁香通
企业机构:
成为企业机构
个人用户:
个人中心
移动端
搜实验
大家都在搜
大家都在搜
0 人通过求购买到了急需的产品
免费发布求购
搜索
发布求购
实验专区
实验库(10000+)
实验问答
实验专题
热门视频
前沿资讯
科研者之家
丁香通
>
实验专区
>
实验问答
>
全部
实验问答
28,831,055 科研人在看
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
构建过表达载体克隆这一步就卡住了怎么办
汤姆卜丽波
你要先明确你的目的片段大小然后选择合适的载体质粒,和内切酶,具体哪一步有问题可以细致的问,实在不行提供基因给公司让公司合成
4 回答
731 围观
4 回答
731 围观
去回答
问
为什么做进化树会显示这个做不出来呀
huarenqiang5
考虑可能是网站会将系列变成反向互补的系列。如果我们建树的系列是从Ncbi上下载来的。那么,目的系列最好也从网上下载。或者将提交的系列版相互补一下,再尝试建树试试。
3 回答
2995 围观
3 回答
2995 围观
去回答
问
同源重组的原理是什么呀 同源臂是什么呀?为什么同源重组的酶可以不用考虑目的片段上有没有呀
汤姆卜丽波
同源重组又称一般性重组。同源重组发生在DNA的同源序列之间,通过配对、链的断裂和再连接,而产生片段交换的过程,是最基本的重组方式,同源臂是指两个DNA片段之间的相似性,主要是因为有同源序列,所以不同考虑目的片段
4 回答
24079 围观
4 回答
24079 围观
去回答
问
pcr的原理是什么呀 有可以详细讲解一下的嘛
汤姆卜丽波
在存在DNA模板、引物、dNTPs、适当缓冲液 (Mg2+) 的反应混合物中,在热稳定DNA聚合酶的催化下,对一对寡核苷酸引物所界定的核酸片段进行扩增,这种扩增是以模板DNA与引物之间的变性、退火、延伸三步反应为一个周期,循环进行,使目标DNA片段得以扩增。
4 回答
1324 围观
4 回答
1324 围观
去回答
问
各位老瑞氏-吉姆萨染色如果用浸染的方式应该怎么操作呢
汤姆卜丽波
手工步骤是 ①滴加姬姆萨染色液A液(0.5〜0.8ml)于涂片上,并让 染液覆盖整个标本涂片染色1分钟;②将姬姆萨染色液B 液滴加于A液上面(滴加之量为A液的2 ~3倍)以洗耳球吹出 微风使液面产生涟漪状,使两液充分混合,染色3〜10分钟; ③水洗(冲洗时不能先倒掉染液,应以流水冲去,以防有沉渣 沉淀在标本上);④干燥,镜检。你要浸染的话可以取一部分AB液出来,这样不怕污染母液
4 回答
2416 围观
4 回答
2416 围观
去回答
问
请问BDNF与IBA-1荧光共定位做不出来的原因是什么?
huarenqiang5
主要考虑是二者的二抗选择不合理导致。建议重新选择二抗试试。
3 回答
431 围观
3 回答
431 围观
去回答
问
小鼠肺泡灌溪液用瑞氏吉姆萨染色液染一直染不好,染色时间都在试剂说明书基础上做了调整,但细胞胞核颜色总是偏深,有染的好的吗
huarenqiang5
考虑肺泡灌洗液重悬液的细胞浓度过大或有核细胞太过密集或PH偏碱导致。建议不改变浓度可以尝试推片制片,然后分别在低倍镜,高倍镜或者油镜下观察和分类细胞。
4 回答
1999 围观
4 回答
1999 围观
去回答
问
ELISA测抗体效价阴性空OD值过高,抗体稀释25600倍之前阴性孔和阳性孔OD值均为2左右
汤姆卜丽波
我之前做ELISA也有这种情况,基本都是洗板子的时候污染了阴性或者空白对照孔,你调整一下流程再试试看
4 回答
1025 围观
4 回答
1025 围观
去回答
问
SA-β-gal染色求助
huarenqiang5
SA-β-gal染色不需要在超净台完成,在普通的实验室完成即可。 是的,加了固定液后就可以不要求无菌了。 可以用烘箱孵育染色。
4 回答
1837 围观
4 回答
1837 围观
去回答
问
蛋白在14-17KDa,wb一直曝光不出来,请问是为什么
balalaLy
14-17分子量不大,转膜一般没问题,可以从抗体的质量、抗体浓度低、蛋白量低、抗体稀释液、tbst这几个方面找。
3 回答
1030 围观
3 回答
1030 围观
去回答
问
审稿人提的问题或修改意见不明白
sswei
首先,诚恳的态度是至关重要的,提交文章修改后要附上一个cover letter。里面包含这些内容:感谢编辑安排审稿以及审稿人提出的宝贵意见。因为你们的建议,经过修改后的文章变得更好,读者们可以获得更有价值的信息。再次感谢编辑和审稿人的帮助。虽然cover letter的内容也都是客套话,但是编辑跟审稿人看着也会舒心不少。即便有时因为研究方向不是很一致,他们有的问题有点业余,又或者提意见时比较不客气
3 回答
635 围观
3 回答
635 围观
去回答
问
求助!蛋白大小在7kda左右做WB的转膜电压还有时间应该在多少啊
汤姆卜丽波
一般转膜的电流在200mA-400mA之间,转膜时间为30-60分钟。也可以在15-20mA转膜过夜。小片段的可以用250mA。
3 回答
3870 围观
3 回答
3870 围观
去回答
问
IOD免疫组化
汤姆卜丽波
没有特别明确的标准,你分离图层后,手动调整,尽量把阳性细胞染色囊括进来就可以了
3 回答
2822 围观
3 回答
2822 围观
去回答
问
求助:WB出现双条带,部分条带不显示
sswei
抗体的原因:不同厂家的抗体特异性会出现不同的差异,大部分都能检测到目的条带,但是有时能检测到非特异性的条带;蛋白亚型表达的原因:做WB经常会发现,一种蛋白有时检测压型很明显,有时不是很明显。参考了很多文献的结果,均有此种情况出现,即使是大家都觉得很确定的蛋白很多时候也会出现不同的亚型。毕竟对很多蛋白认识有限。这种情况不要怕的,尽管按照真实结果去处理,千万不要为了让结果好看或者符合大家的意思而去做修
3 回答
1224 围观
3 回答
1224 围观
去回答
问
泛素化连接方式
loveliufudan
1. 直接通过WB比较确定泛素化方式有以下局限性:(1) WB不能明确区分不同连接方式的泛素化。(2) 泛素化不一定导致靶蛋白降解,连接方式不同对蛋白表达量的影响可能不同。(3) 需要抑制蛋白酶体活性,否则被泛素化标记的蛋白可能已被降解。2. IP确定泛素化方式的优势:(1) 可以分离不同连接方式的泛素化蛋白。(2) 明确鉴定泛素化部位和类型。(3) 不依赖于蛋白降解,直接检测标记状态。(4) 结
3 回答
1434 围观
3 回答
1434 围观
去回答
问
求助 蛋白跑胶出现奇怪现象
sswei
1.样品太浓了2.样品中含有溶解性不好的东西
3 回答
2261 围观
3 回答
2261 围观
去回答
问
PB缓冲液pH可以调到9.6吗?
汤姆卜丽波
可以调的,你们实验室平时用什么调就用什么调,我们一般用氢氧化钠和硫酸
3 回答
2076 围观
3 回答
2076 围观
去回答
问
蛋白纯化buffer 变浑浊求助
汤姆卜丽波
肯定有影响的,你纯化出来的蛋白跑胶看看大小对不对,有没有杂带,浑浊的就不要用了,下次注意操作时避免污染
3 回答
1506 围观
3 回答
1506 围观
去回答
问
大鼠脑组织FTO好跑吗?我为什么用超敏显影还需要5分钟?还巨丑无比。求救!!!
汤姆卜丽波
你可以发一下你的条带,如果可以发出来光,只是条带不齐或者背景杂乱那就要适当调整封闭的时间,每次洗涤的时候充分洗涤
3 回答
474 围观
3 回答
474 围观
去回答
问
小鼠肠道类器官
Keven轩
这两张图显示的细胞都是细菌污染,重新做吧
3 回答
742 围观
3 回答
742 围观
去回答
1
•••
91
92
93
94
95
•••
1010
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
领取干货资料
反馈
TOP
打开小程序