IOD免疫组化

没有特别明确的标准，你分离图层后，手动调整，尽量把阳性细胞染色囊括进来就可以了

步骤参考:

1.打开Image J软件，安装好。

2.点击File，点击Open，导入你要统计的免疫组化的图片。

3.点击Image，点击type，下拉，将RGB Color改成RGB stack。

4.接着点击analyze，点击set measurement，弹出如下对话框。点击area fraction，点击ok。

5.接着开始统计阳性结果。点击analyze，点击measure，出现的%Aera下面对应的数字即你要的结果。

阳性信号以OD值表示

1.打开图片，Image，type，8-bit将图片转换为灰度图片。

将8-bit灰度图片转换为OD值：Analyze，Calibrate，选择Uncalibrate OD即可校准

选择需要测量的参数：在ImageJ软件Analyze下选择Set Measurements设置测量参数，选择Integrated density，Area，Limit to threshold（Image -> Adjust -> Threshold 调节阈值，红色代表选中，选择Limit to threshold只计算红色选择的面积），点击OK。

对于IOD的设置标准,一般有以下几点建议:

1. 设置阴性对照组,测量非特异性染色的IOD作为基础值。

2. 实验组IOD减去阴性对照组IOD,得到特异性染色的IOD。

3. 将特异性IOD标准化,即除以总面积,得到IOD/Area,消除面积差异影响。

4. 相同实验重复3次以上,取IOD/Area的平均值。

5. 和对照组相比,实验组IOD/Area如增高30%以上,可判断为阳性结果。也可以设定其具体阈值。

6. 不同试验之间要设置共同的阳性对照,用于不同批次间的比较。

7. 免疫组化操作每个步骤需优化以减少背景。

综上,免疫组化IOD的析结果判断,需要参考阴性对照组基础值,设定适当的阈值和阳性对照,并重复试验取平均值,从而得到准确的定量结果。