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问
这个模型可否用于检测肿瘤免疫细胞及免疫因子?
此用户已注销
可以的,我们就有同事就做的
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问
实时荧光定量 PCR 一定要设标准品吗?ΔCT 和 ΔΔCT 哪种方法好?
prime0711
我用的是ΔΔCT,没有用过标准品
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问
脱片产生的原因是什么?如何防止脱片?
口贝力15206
由于免疫组化过程长,组织切片长时间浸泡在缓冲液和试剂内经过多次冲洗浸泡和作用,尤其是在抗原修复过程中,由于高温、高压、辐射等因素的影响,极易造成脱片
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问
定量PCR的扩增曲线不平滑是为什么?
gjh731
1,体系不稳定,加大体系,2,如果是国产试剂的话可能这种现象算正常的,因为每次循环完后读荧光时,国产的染料不一定每次都结合的到DNA上,因此即使扩增出片的,也可能因为染料无法结合到DNA导致荧光值上下波动。3,引物扩增效率不高,非特异性不强,4,延伸出问题,可以考虑72度延伸时间增长,
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问
请教有关TSC2蛋白的转膜条件是什么?
天王盖地虎-0
Tuberin 我们也在做,或许可以把你的样本给我试试我手里的抗体
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问
siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?
alaling
siRNA的直接作用(如果有作用的话)是抑制目标mRNA的表达,所以你应该检测DMT1的mRNA的表达情况,如果mRNA也没有低表达,说明该siRNA设计的不行。你检测蛋白的表达不太科学,毕竟蛋白和mRNA之间还有一道“翻译”的墙隔着,两者的上下调并不一定完全一致。
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问
有时片子上的组织有裂纹,是脱水时间太长的缘故吗?
akitten
有可能 也有可能是二甲苯透明时间过长 拿出后封片速度较慢 片子在空气中已干燥的话 就会容易有裂纹出来
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问
有谁做过检测血浆(或者血清)样品中的小rna的表达差异的,检出率高吗?
senjie2008nju
血浆miRNA检出率其实挺好的,就是血样的处理、一些细小的实验步骤对实验结果的影响很大。我做了一些血浆miRNA的检测有兴趣我们可以讨论啊。
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问
IFN-γ 的 PCR 均不能扩出片段是为什么?
wangweishi_1986
如果引物设计的没问题的话,两个建议:1.降落PCR,2.先将引物对99℃10s,再放冰上,再加到PCR体系里,试一试
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问
为什么要铺两层浓度不同的琼脂呢?
塞舌尔墨宝
底层浓度高提供营养同时防止细胞贴壁,上层浓度低有稀疏的孔径也可提供营养使肿瘤细胞形成细胞球,同时可加入其他药物或细胞因子设置不同对照,
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1366 围观
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问
水通道蛋白如何提取呢?
塞舌尔墨宝
提取总蛋白,上样检测,利用特异性抗体就可以把你需要观察的对象区别出来
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问
在什么情况下使用TritonX-100?
苹果嘿嘿
核染时使用
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问
我的菌落 PCR 一直做不出来,一直没有找到原因,希望大神帮忙给点思路~
我是金博士
这里的问题很多:1、连接后有没有跑过条带,是不是已经连上了?2、如果连接产物,跑电泳有条带,再转化后没有条带,说明转化有问题,培养时间多长?Amp抗性筛选,容易出现卫星菌落,严格控制时间在12-16h,尽量多挑几个菌落PCR。3、诱导不出,是很正常的,需要摸索最佳诱导条件,可以参考文献报道的诱导条件,然后摸索。比如改进诱导剂浓度,温度梯度,诱导时间等。
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问
苯胺黑染色的原理是什么,具体怎样操作?
wumh1989
可以看看细菌的带电性,苯胺黑染色是负性染色,负染后杆菌和球菌就很容易区分了(直接看细菌形态即可区分)。但这种染色对于较短的杆菌有时也不是那么容易与球菌区分的,就需要根据细菌特性进行相应的化学方法鉴别。PS:负染色法需要使用酸性染料来染色,如伊红或苯胺黑。因为细菌体表面带负电,而酸性染料的色原也带负电,所以色原只能将背景染色。没有染色的细菌在染色背景下就能很容易的观察到。(引自百度百科)
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问
为什么我跑出来的 PCR 条带在起跳前会有那么多小锯齿样波动,而人家的就是光滑的直线?
sayid
注意看你的荧光曲线图的纵坐标数值,是不是很低(正常几万到几十万,你的是不是只有几千或者更低)?是不是你的曲线最终达到平台期后的数值很低。你这种情况多数是因为模板含量低或引物扩增效率低,没有出现强扩增,信噪比太低,起跳前的背景信号被放大出现杂波。因为信噪比大,检测信号其实很不准确,两孔差异就大了。建议换模板或者换引物,或者看看有没有其他体系添加失误的问题。
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问
跑 PCR 时条带出来了,可 marker 没跑开是什么原因?
我是金博士
marker没跑开主要有这几个原因:marker上样量太多,胶的浓度问题,marker自身问题,跑胶时间不够。你可以换个marker或者减少上样量,多跑一下试试看。
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问
做完转化后培养的菌(DH5a)长不大是什么原因啊?
我是金博士
建议你重新做,可以用氯化钙法制备,转化效率不错的。去年2月份的能转化出来还是很奇迹的。一般感受态最多3个月,都不保险。你这样长出来的菌是不正常的,不用纠结了,不要,重新做。
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问
做转基因鼠鉴定,内参跑出三条带亮度差不多而最后一条带亮度很高,可能是什么原因?
alaling
1.内参抗体质量有问题,不知其他人用起来什么样的。2.内参发光很强,曝光时胶片有移动也会出现你说的情况。3.转膜的时候胶有移位(可能性很小)。
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问
为什么质粒DNA能在真核细胞里面表达?
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问
我想测 ERK1/2 的免疫组化,能用 ERK1 和 ERK2 分开的抗体就能达到 ERK1/2 的效果吗?
我是金博士
个人认为还是尽量采取和文献一致的吧。混合使用,能不能达到效果,你可以试试的嘛。另外即使买到的是一样的抗体,也不一定能做的出来。
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