丁香通
丁香园
论坛
医药招聘
丁香医生
更多
调查派
用药助手
丁香搜索
医药数据库
来问医生
我要登录
|
免费注册
|
我的丁香通
企业机构:
成为企业机构
个人用户:
个人中心
移动端
搜实验
大家都在搜
大家都在搜
0 人通过求购买到了急需的产品
免费发布求购
搜索
发布求购
实验专区
实验库(10000+)
实验问答
实验专题
热门视频
前沿资讯
科研者之家
丁香通
>
实验专区
>
实验问答
>
全部
实验问答
31,477,046 科研人在看
我要提问
全部
细胞
免疫
蛋白质
PCR
DNA
RNA
微生物
动物
遗传
生物信息
其他
问
蛋白质免疫印迹一1抗2抗用什么稀释更好?
蜻蜓美女
1,我们实验室是用牛奶加TTBS稀释的,但是磷酸化的抗体一般是BSA加TTBS,效果很好。2,我们实验室是用水。希望对你有帮助
11 回答
8832 围观
11 回答
8832 围观
去回答
问
WB转膜曝光后少样本是为什么?
phhcrab
你是用传统胶片曝光的还是化学发光成像?每次都出不来的是同一个泳道的吗?如果每次都是固定的位置出不来,是不是可以检查一下实验硬件?
4 回答
2776 围观
4 回答
2776 围观
去回答
问
WB 没有看到条带是什么原因?
Neuron_Glia
若抗体中有防腐剂,如叠氮钠,会使荧光猝灭;另外,荧光越强,淬灭越快。但是你看不到条带,最可能的原因还是抗体效价较低或浓度不足。
3 回答
2480 围观
3 回答
2480 围观
去回答
问
我最近做western的内参条带特别好,背景也很干净,但是目标蛋白要么没有条带,要么有条带但是背景很脏,为啥呢?
我是金博士
1、内参与目的蛋白用的是相同的二抗吗?2、洗膜3min,5-6次3、背景高,调整二抗浓度4、时有时无,请在转膜后用丽春红染膜
1 回答
4649 围观
1 回答
4649 围观
去回答
问
目的带做出来了,但是为什么膜的内参一直都没跑出来?
我是金博士
1、样品中无内参蛋白表达。 2、内参不能识别你检测的种属的样品?
1 回答
2435 围观
1 回答
2435 围观
去回答
问
请问客养的小分子量蛋白的转膜条件 OK 吗?
xuxian1225
完全可以,我做的蛋白就是11k的,100V转120分钟都没问题,90分钟对这么小的蛋白足够了。
1 回答
3791 围观
1 回答
3791 围观
去回答
问
为什么 WB 实验的目的蛋白发的很慢,而且不太清楚?
我是金博士
1、发光慢,可以考虑换用Millipore的ECL2、15孔上样量有限制,大了会串孔
1 回答
1476 围观
1 回答
1476 围观
去回答
问
蛋白提取总是出现问题?
我是金博士
1、50-100ul,看细胞沉淀的多少而定2、细胞太少了?细胞中DNA含量比较大,如果有条件,用超声处理一下就好了
1 回答
1898 围观
1 回答
1898 围观
去回答
问
胶片定影之后显得有点暗,不够清亮是不是定影液的问题呢?
我是金博士
显影液的问题,10%与12%的胶跑出来的marker位置是不一样的。
1 回答
745 围观
1 回答
745 围观
去回答
问
WB 结果的内参非常好,既没有背景条带也亮,而目的就不行,不是没有条带就是背景很高,这又是什么原因呀?
我是金博士
1、任何一个公司的抗体都不是百分之一百的。我认为CST的抗体成功率是目前最高的2、表达量的多少可以看看文献3、CST说明书用的是什么细胞作为抗原呢?如果你手上有可以做个验证。看是否你做的细胞表达少
1 回答
2617 围观
1 回答
2617 围观
去回答
问
Western 经常出现白板,连内参都不出来?
我是金博士
缓冲液的pH值,注意调教一下pH计
1 回答
1741 围观
1 回答
1741 围观
去回答
问
为什么用四氯萘酚和 DAB 结合显色后,出现非常多的非特异性条带,而且背景显色一片?
我是金博士
1、直接DAB显色不行吗?2、二抗好像效果不好哦3、先直接用DAB试试,另外确认二抗没有带出来非特异性条带
1 回答
3114 围观
1 回答
3114 围观
去回答
问
WB一抗二抗配好后4℃保存能多久?一个月怎么样?
我是金博士
1、一抗4度可以在一周左右,加一点NaN3二抗现用现配!且不可加NaN3丽春红不会影响,染完直接封闭,封闭后丽春红就没了。2、一抗是什么?二抗还需要孵育过夜?3、先把内参做好
1 回答
18824 围观
1 回答
18824 围观
去回答
问
显影时背景很黑,我就洗了两天膜,然后又显影了一次,这次是白片?
我是金博士
最好stripping一下,背景很黑的话需要调整一下二抗浓度。
1 回答
2832 围观
1 回答
2832 围观
去回答
问
如何确定普通反转录 PCR 时 cDNA 的用量?
苏格兰白草莓
必须要保证cDNA的量要一致才有可比性,所以最好还是做RT-qPCR。之所以要做内参,一是利用△△C法运算得到基因差异,二就是利用内参可看得出你每孔的cDNA模板量是否具有一致性,一般来说,我们实验要求样品内参的Ct值最好相差不要超过0.2~0.5,还有值得注意的是,如果内参Ct值出现过大或者过小都会影响到你的实验数据分析,一般来说内参在Ct值=12~15的位置左右为宜
4 回答
2715 围观
4 回答
2715 围观
去回答
问
我在做Western Bloting时,加ddH2O稀释成,不知有影响吗?
1891 围观
去回答
问
想保证上样量一致,那么调浓度时用什么溶剂稀释蛋白浓度呢?
5824 围观
去回答
问
兔源和鼠源抗体在制作上有何区别吗?
2628 围观
去回答
问
我用的预染marker,转膜时发现完全没有转到膜上,但是胶上也没有marker,这是什么原因呢?
我是金博士
1、这个正常,转膜结果到底如何需要染膜来看膜上的蛋白 2、不能这样来确定 3、这个很奇怪,没碰到,看看你做的三明治是否成功,仪器是否有问题 4、与电压之类是有关系,但是不应该2个泳道的marker,一好一坏
1 回答
6708 围观
1 回答
6708 围观
去回答
问
虽然阳性样品能染出条带,但以前阳性质粒也没做出来,可能不会是转膜时间问题?
1 回答
1610 围观
1 回答
1610 围观
去回答
1
•••
851
852
853
854
855
•••
1013
跳至
页
意见反馈
合作咨询
提问
扫一扫
领取干货资料
反馈
TOP
打开小程序