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        siRNA转染后目的蛋白没有减低是为什么?

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        王建勇

        我想用siRNA抑制DMT1,在吉马公司买了三个siRNA,我用的是lipo2000转染,转染前饥饿2h,转染6小时,后换成完全培养基48小时,对照使用转染GAPDH做的,接下来WB检测DMT1,却没有观察到目的蛋白的下降,请问有人遇到过相似的情况吗?应该怎么解决。
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        3 个回答

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        mybiosciences

        有帮助
        转染率测了吗?如果载体携带荧光蛋白,可以直接用流式检测转染率,看看问题是不是出在这一环节
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        kongguli

        有帮助
        应该先做REALtimePCR检测一下吧,如果确定敲低了,然后再做蛋白水平的检测,而且公司做的siRNA应该会说清楚支持什么水平的检测吧,可能他只保证real time 的检测
        user-title

        alaling

        有帮助
        siRNA的直接作用(如果有作用的话)是抑制目标mRNA的表达,所以你应该检测DMT1的mRNA的表达情况,如果mRNA也没有低表达,说明该siRNA设计的不行。你检测蛋白的表达不太科学,毕竟蛋白和mRNA之间还有一道“翻译”的墙隔着,两者的上下调并不一定完全一致。
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