• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        IFN-γ 的 PCR 均不能扩出片段是为什么?

        相关实验:聚合酶链式反应(PCR)

        user-title

        嘎嘎1989

        最近师兄让我帮他做 IFN-γ 的 PCR,用正常人 cDNA 和 molt4、jurkat 细胞株均尝试了55°,58°,60°,65°的退火温度,均不能扩出目的片段,只能见到引物二聚体,β2M 能够扩出来,说明体系应该没有为题,引物有introvegene提供。请各位高手指点,排除引物的问题还可怎样进行尝试?IFN-γ的片段大小为 553kb,上游引物:5'- GCTCTAGAGATTTCAACTTCTTTGGCTTA-3' 下游引物:5'-TTGTCGACGCAGGCAGGACAACCATTACT-3'
        wx-share
        分享

        2 个回答

        user-title

        wangweishi_1986

        有帮助
        如果引物设计的没问题的话,两个建议:1.降落PCR,2.先将引物对99℃10s,再放冰上,再加到PCR体系里,试一试
        user-title

        苏格兰白草莓

        有帮助
        你的引物片段好长啊,而且你这个是人IFNG的引物么?我用PRIMER 5验证了一下,有些序列和人的IFNG匹配不上啊,你这个引物是自己设计的还是找公司设计的还是文献上给的啊,文献的话IF是多少啊?我把PRIMER 5的结果给你看一下,你这个还不能够拿到BLAST上去验证,因为和IFNG匹配不上,大概看了一下你这个引物还是存在一定问题的。
        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序