我的菌落 PCR 一直做不出来，一直没有找到原因，希望大神帮忙给点思路~
hbj1204419802
最近在 PCR 实验当中利用 p-EASY E1载体与目的基因相连后导入trans T1 感受态细胞中，然后再 Amp 平板上培养过夜，挑单菌落进行菌落 PCR 检验，然后琼脂糖凝胶电泳，但一直没有结果，条带跑不出来，只能看出引物二聚体。另外一个菌体在诱导时一直诱不出，SDS-PAGE 电泳的条带与未诱导之前没有改变，不知道哪里出了问题，希望各位大神帮忙给点建议~
1 个回答
我是金博士
有帮助
这里的问题很多：1、连接后有没有跑过条带，是不是已经连上了？2、如果连接产物，跑电泳有条带，再转化后没有条带，说明转化有问题，培养时间多长？Amp抗性筛选，容易出现卫星菌落，严格控制时间在12-16h，尽量多挑几个菌落PCR。3、诱导不出，是很正常的，需要摸索最佳诱导条件，可以参考文献报道的诱导条件，然后摸索。比如改进诱导剂浓度，温度梯度，诱导时间等。
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