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实验问答

31,174,638 科研人在看

问为什么 WB 有荧光，但曝光失败？

yunzhongmanbu555

我觉得很可能是显影液的问题。新鲜的显影液应该是淡黄透明，如果变成酱油色就尽量别用了。以前我就遇到过这种情况，一换显影液，马上就可以显出了。

11 回答5149 围观

问病理科的标本（肿瘤）石蜡切片，可以做western blot吗？

zq2008fish

可以的，用过西安晶彩的石蜡组织蛋白提取试剂盒提蛋白，再按常规WB实验操作，做出来效果还不错。

4 回答4181 围观

问请教有关TSC2蛋白的转膜条件是什么？

天王盖地虎-0

Tuberin 我们也在做，或许可以把你的样本给我试试我手里的抗体

3 回答1340 围观

问有时片子上的组织有裂纹，是脱水时间太长的缘故吗？

akitten

有可能也有可能是二甲苯透明时间过长拿出后封片速度较慢片子在空气中已干燥的话就会容易有裂纹出来

3 回答1991 围观

问针对EV71的VP1的特异记忆性B细胞，对记忆B细胞进行单个细胞RT-PCR，如何设计引物呢？

yuandingli

你如何获得单个B细胞的？如果是血液来源的B细胞，还要筛选吧？如果是融合的细胞，用恒定区的引物就行了。

2 回答1620 围观

问贝类的血细胞能否直接用试剂盒？

苏格兰白草莓

申请个试用装试试就知道了，反正实验材料还是很好获得的吧

2 回答2027 围观

问做转化后菌P时直接挑取单菌落进行PCR，有哪位大侠做成功了？

我是金博士

你是有啥问题吗？转化挑取单菌落PCR，菌落不要太多，其余就按常规PCR流程。一次性多P个几管，分别从不同的平板上挑。

1 回答3225 围观

问IFN-γ 的 PCR 均不能扩出片段是为什么？

wangweishi_1986

如果引物设计的没问题的话，两个建议：1.降落PCR，2.先将引物对99℃10s，再放冰上，再加到PCR体系里，试一试

2 回答1968 围观

问为什么要铺两层浓度不同的琼脂呢？

塞舌尔墨宝

底层浓度高提供营养同时防止细胞贴壁，上层浓度低有稀疏的孔径也可提供营养使肿瘤细胞形成细胞球，同时可加入其他药物或细胞因子设置不同对照，

2 回答1465 围观

问WB 的试剂准备应该自己配制还是买试剂盒？能给点建议吗？

momimimimomi

做WB实验比较花钱的是一抗，国外进口的1支大概在3000元-5000元之间不等（根据你的指标而定），二抗价格相对便宜很多，如果使用荧光二抗的话，1瓶Dylight 2000元的可以使很久。剩下的试剂均可以单独购买，Marker、蛋白酶抑制剂、磷酸化蛋白抑制剂最好买进口的，价格可能在1000元-3000元左右（根据公司、规格），剩下买国产的即可，如裂解液、电泳液、电转液、Tris-Hcl、SDS-P

2 回答2457 围观

问水通道蛋白如何提取呢？

塞舌尔墨宝

提取总蛋白，上样检测，利用特异性抗体就可以把你需要观察的对象区别出来

2 回答1821 围观

问荧光免疫 PCR 用什么仪器获得不同颜色标记的结果？

苍狼-huahua

现在市场上的PCR仪器多种多样，各自采用获取荧光标记结果的方式大不相同。现在潮流方向是用荧光探针(带有标记基因的片段和荧光基团)参与聚合酶链反应，当荧光强度达到机器可以判读的阈值，系统的原始扩增曲线就会上扬。

2 回答1682 围观

问苯胺黑染色的原理是什么，具体怎样操作？

wumh1989

可以看看细菌的带电性，苯胺黑染色是负性染色，负染后杆菌和球菌就很容易区分了（直接看细菌形态即可区分）。但这种染色对于较短的杆菌有时也不是那么容易与球菌区分的，就需要根据细菌特性进行相应的化学方法鉴别。PS:负染色法需要使用酸性染料来染色，如伊红或苯胺黑。因为细菌体表面带负电，而酸性染料的色原也带负电，所以色原只能将背景染色。没有染色的细菌在染色背景下就能很容易的观察到。（引自百度百科）

1 回答4037 围观

问为什么我跑出来的 PCR 条带在起跳前会有那么多小锯齿样波动，而人家的就是光滑的直线？

sayid

注意看你的荧光曲线图的纵坐标数值，是不是很低（正常几万到几十万，你的是不是只有几千或者更低）？是不是你的曲线最终达到平台期后的数值很低。你这种情况多数是因为模板含量低或引物扩增效率低，没有出现强扩增，信噪比太低，起跳前的背景信号被放大出现杂波。因为信噪比大，检测信号其实很不准确，两孔差异就大了。建议换模板或者换引物，或者看看有没有其他体系添加失误的问题。

1 回答1675 围观

问我觉得肿瘤淋巴结转移主要是细胞吞噬的结果（免疫细胞将肿瘤细胞带入淋巴结），如何实验呢？

1 回答1415 围观

问跑 PCR 时条带出来了，可 marker 没跑开是什么原因？

我是金博士

marker没跑开主要有这几个原因：marker上样量太多，胶的浓度问题，marker自身问题，跑胶时间不够。你可以换个marker或者减少上样量，多跑一下试试看。

1 回答5603 围观

问做完转化后培养的菌（DH5a）长不大是什么原因啊？

我是金博士

建议你重新做，可以用氯化钙法制备，转化效率不错的。去年2月份的能转化出来还是很奇迹的。一般感受态最多3个月，都不保险。你这样长出来的菌是不正常的，不用纠结了，不要，重新做。

1 回答6610 围观

问WB 定量测定光合酶 PEPCase，一抗怎么选择？

1967 围观

问为什么质粒DNA能在真核细胞里面表达？

3944 围观

问冻存组织如何解冻

fountain571

冻存的组织解冻后一般对微结构都有损伤如果后期再固定做组化的话不好

1 回答2996 围观

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