为什么用四氯萘酚和 DAB 结合显色后，出现非常多的非特异性条带，而且背景显色一片？

我是 western blotting 新手，现在我遇到了如下问题：用四氯萘酚和 DAB 结合显色后，出现非常多的非特异性条带，而且背景显色一片，第一张图展示的是 western blotting 显色后结果，转膜使用恒压 15v 45min，用丽春红显色还可以，蛋白大小为 117KDa，是大肠杆菌原核表达的蛋白。封闭是用 TTBS 稀释的5% 脱脂乳 4℃ 过夜 1-4 号用的是一种多抗（实验室自己制备的），稀释倍数分别为 1:200 与 1:400，5-10 号用的是另一种多抗（也是实验室自己制备的），稀释倍数分别为 1:400 1:800 与 1:1000TBST稀释，作用时间为 37℃ 1.5h 二抗用的是 HRP 标记的羊抗兔，单号稀释倍数为 1:1000，双号稀释倍数为 1:2000TBST稀释，作用时间为37℃ 1.5h 显色方法使用四氯萘酚结合 DAB 进行的，先用四氯萘酚显，然后用 DAB 显，（中间粉色的是只用四氯萘酚显色的）但是从图中的结果来看，无论哪种方式结合的都很不理想。