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        我最近做western的内参条带特别好,背景也很干净,但是目标蛋白要么没有条带,要么有条带但是背景很脏,为啥呢?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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        我是金博士

        我最近做western的内参条带特别好,背景也很干净,但是目标蛋白要么没有条带,要么有条带但是背景很脏,请帮忙分析下原因呗,谢谢!条件:8%的胶,上样量40-100ug,浓缩胶80V,分离胶100V。半干转转膜15v,20min,或者湿转0.29A 1.5h,5%脱脂奶粉室温封闭1h,一抗SREBP (125/68kda),MDM2(90/60kda):(santa,1:100)4度过夜,TBST洗3次,每次10min。二抗(abcam1:5000 或者 cst1:2000)室温孵育一小时,TBST洗3次,每次10min。我有的时候每次洗20min,洗3次,但是背景依然很深,有的地方黑黑的一团。我不知道怎么发图片,希望我的描述够清楚。
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        1 个回答

        user-title

        我是金博士

        有帮助
        1、内参与目的蛋白用的是相同的二抗吗? 2、洗膜3min,5-6次 3、背景高,调整二抗浓度 4、时有时无,请在转膜后用丽春红染膜
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