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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
为什么做的 Western 最后都没有显出影啊?
wuhao88
在两个实验室遇到过ECL试剂盒出问题,第一次是前人用试剂盒时吸取液体没有换枪头,试剂盒污染;第二次是师兄用下来的试剂盒,开封日期已经2年,最后验证是试剂盒失效,换了试剂盒之后就曝出很漂亮的条带,浪费了我半个月时间。我遇到同样的问题是从头找起的:先用考马斯亮蓝染胶看看胶上有没有蛋白,排除蛋白被降解,如果没有问题,再用考马斯亮蓝染转膜后的膜,可以看到膜上是不是有蛋白,如果还没有问题,就要注意二抗是不是
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问
为什么同一批次提取蛋白跑出的条带不一致?
dxymuchong
我可以这么理解吗:内参稳定说明上样量稳定(应该大致是一样的),所以不存在什么上样量不一样的问题;出现这样的结果,问题出在每一步都有一定的可能性,比如电泳,转膜,敷抗体,显色等等。但据我所知,WB最关键的还是转膜和敷抗体步骤,可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。我的建议是你再认认真真,仔仔细细做几遍,很可能重复性就做出来了。只是个人观点。
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问
电泳时条带跑出凝胶,是什么情况?
我是金博士
这是你跑电泳时间太长了。
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问
real-time PCR 与 reverse-transcription PCR 有什么区别?
woodeygao
reverse-transcriptionPCR是把提取的RNA逆转录成为cDNA,RNA——cDNA,靠的是逆转录酶;RT-qPCR,Real-Time定量PCR,是用来扩增DNA,和普通PCR方法不同是加入了荧光染料(楼上说的SYBR只是一种),通过检测器检测到荧光信号变化来对扩增的DNA进行定量,DNA-DNA,靠的是DNA合成酶和DNA外切酶。简单来说reverse-transcripti
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问
细胞免疫荧光
浩ert
注意一抗浓度
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问
怎么通过一张片子上的条带就知道它的分子量?
joson12345
发光marker啊,曝光时和目的蛋白同时显影,而且分子量相对预染的要更加准确。
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问
二抗孵完后不及时曝光,应存放在哪里呀?
windy609473269
只要用TBST泡着,放四度冰箱就可以了
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问
荧光定量 PCR 的退火温度怎么设定?怎样摸索?
dxy_ivfir56
请问做退火温度梯度pcr是用引物跑普通pcr还是跑荧光定量pcr
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问
大肠埃希菌能使甘露醇,蔗糖,麦芽糖产酸产气吗?
云天昊
这个是应该是可以的
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问
请问为什么我提蛋白的时候蛋白浓度总是很低?
joson12345
可以少加RIPA,或者把贴臂细胞消化下来后取细胞沉淀再加裂解液,看能否提高浓度,能杂出条带就有希望,每次都做内参,同一张膜做,看下趋势是否还是随机。
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问
为什么 WB 做出来是白色的条带?
应用场景
二抗浓度或者目的条带丰富过高,很快消耗了底物,所以形成了白色条带
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问
附睾脂肪冰冻切片时如何切好,请教前辈们
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问
WB曝光出来白色条带?
极客医生
如果是用的ECL话,可能是信号太强了
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问
抗体保存
alaling
看你本身抗体浓度如何,如果低的话就赶紧用吧,如果像二抗之类比较高的,放一两个月没什么问题
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问
胚胎 RNA干扰是用 shRNA 还是慢病毒?大概什么时期注射?
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问
Trizol提取淋巴细胞总RNA我在提RNA时,可以从-80℃里面拿出来再多加点Trizol 把不溶的沉淀再溶吗?
年华可可
收集好细胞以后,1mL PBS洗一次,然后去掉PBS的时候用移液枪吸出上清900uL以上,之后再把细胞沉淀吹起(留少量液体比较容易吹散细胞,而不是大量液体去吹打),然后再加Trizol,vortex剧烈震荡一分钟,500万个细胞不算多,应该没有问题的
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问
请大家推荐一款好用的转染试剂?
叶子的科研
N2a 也称为Neuro-2a,是小鼠来源神经瘤母细胞,对于外援物进入细胞体内很是敏感,我们实验室在转染siRNA到小鼠神经原代里面使用的是zeta life Advanced DNA RNA转染试剂,转后细胞状态基本没有变化,做wb和QPCR检测有敲低。
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问
求问各大神,WB 跑出来的带子连成一条直线是怎么回事?
joson12345
样品制备的问题,如果样品粘稠的话,用全能核酸酶处理一下。
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问
琼脂糖凝胶电泳时,maker跑出来了,但是目的条带完全没有,怎么办
前置OTZ
RNA没提好,重来吧
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问
目的条带位置处却没有条带,出现很多杂带,分子量大小小于目的蛋白,这是怎么回事呢?
瓦塔瓦塔嘿
请问您这个问题解决了吗
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