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        外周血单个核细胞(PBMC)

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        丁香实验

        如图是我今天用ficoll分离的外周血单个核细胞,铺板后的照片,本人第一次做,存在以下疑问: 1.图中大的细胞是单个核细胞吗(PBMC)?周围散在的小的透亮的(箭头所示)是什么?如何去除? 2.PBMC经培养后是贴壁的还是悬浮的?我看文献中说是贴壁的是单核细胞,不贴壁的是淋巴细胞,不知道是不是这样? 3.PBMC是不是不能传代培养,六孔板里的细胞数就是你铺板的时候的数量?
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        3 个回答

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        丁香实验

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        1.我做过小鼠单核细胞分化DC,分离纯化后第一天就加因子了,单核培养周期看分化的细胞种类有关,我诱导养的鼠DC都养过14天的还存活着,破骨分化的就不知道了。铺板1640+FBS是所有分化都需要的,但血清浓度看有的资料说对分化速度有影响(具体以前在丁香看到过可以版内搜索找找),诱导破骨贴壁情况就不知道了。我养DC时贴壁情况这样的先贴壁后悬浮
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        丁香实验

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        破骨细胞没诱导培养过,刚看了下资料,猜测你估计是用血液单核细胞诱导法诱导分化培养,这个就需要贴壁的单核细胞,单核细胞是半贴壁的细胞,可以只加培养液不加血清诱导因子于培养箱孵育1-2h,然后用PBS慢慢清洗去除不贴壁的淋巴细胞和其他杂细胞杂质等,这样六孔板下单核细胞纯度就高了,看了你这图片,铺板密度有点低啊,以前做过2-undefined10^6/ml铺孔PBMC分离单个核细胞,然后洗涤纯化,单核纯度很高。然后加因子血清诱导就靠自己找资料做了
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        丁香实验

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        当然大的是啊,小的是其他杂细胞(血小板等),去除?那就用免疫磁珠法提纯去除。贴壁的是单核细胞,不贴壁的是淋巴细胞,还有PBMC是人外周血单个核细胞包括单核细胞和淋巴细胞等,六孔半下既有悬浮又有贴壁(按照这个特性可以把单核细胞跟淋巴细胞分离开来),铺板数量么,你要从pbmc里分化培养什么?CTL?DC?NK? PBMC传代培养?单核不会了,只能分化。淋巴可以增殖培养。
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