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        低丰度表达的蛋白做WB有什么好方法吗?

        相关实验:蛋白质免疫印迹(Western Blot,WB)

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        丁香实验

        我最近要做一个蛋白的WB实验,之前做过PCR,反转后的cDNA样品稀释5倍后,结果显示那个目标蛋白的CT值在31-33之间,相应的GAPDH的CT值是16左右,最近做了好多次WB,用过3个品牌的抗体,但是做出来的条带都很难看,要么不出条带,要么就一下子出现多个条带,用过超敏的化学发光液但是也没有很好的结果,下面是我做过的一些图,图1、图2、图3分别是用3个不同品牌的抗体跑出来的结果

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        1 个回答

        user-title

        丁香实验

        有帮助
        低丰度蛋白用WB检测的确会有些困难,但第二张我看到目的条带了,既然丰度低就意味着非特异性结合会提高,我建议你有两点: 1,二抗浓度的把握要精准,在能呈现目的条带时降低二抗非特异性结合的概率 2增加Tween-20的工作浓度,用更改过的工作浓度去配置TBST清洗,背景的效果可能会改善不少,自然而然目的条带也会展现出来了。
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