低丰度表达的蛋白做WB有什么好方法吗？
丁香实验
我最近要做一个蛋白的WB实验，之前做过PCR，反转后的cDNA样品稀释5倍后，结果显示那个目标蛋白的CT值在31-33之间，相应的GAPDH的CT值是16左右，最近做了好多次WB，用过3个品牌的抗体，但是做出来的条带都很难看，要么不出条带，要么就一下子出现多个条带，用过超敏的化学发光液但是也没有很好的结果，下面是我做过的一些图，图1、图2、图3分别是用3个不同品牌的抗体跑出来的结果
1 个回答
丁香实验
有帮助
低丰度蛋白用WB检测的确会有些困难，但第二张我看到目的条带了，既然丰度低就意味着非特异性结合会提高，我建议你有两点：
1，二抗浓度的把握要精准，在能呈现目的条带时降低二抗非特异性结合的概率
2增加Tween-20的工作浓度，用更改过的工作浓度去配置TBST清洗，背景的效果可能会改善不少，自然而然目的条带也会展现出来了。
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