培养液分泌蛋白质谱前处理

相关实验：表达蛋白检测实验

榕城小菜鸟

2021-11-02

各位前辈，我想要用蛋白质谱检测实验组和对照组细胞培养液中的蛋白的表达差异情况，我打算用附件文献中的方法，但文献中只提到了所用溶液的终浓度，并未提及配制方法。现在想问一下关于所用试剂DTT、IAA、NH4HCO3溶液的配置方法，是用二次水还是需要用缓冲溶液配？还有就是这些试剂的用量，文献中也没有提到用量。或者大家有什么其他protocol也可以交流一下，我们实验室之前没人做过蛋白组学的实验，请大家帮帮忙。

2 个回答

青木书生

2021-11-02

有帮助

非标，具体原理你可以去看看我之前的帖子。你这个实验，前期定量在这个实验里面非常重要，毕竟全蛋白如果TIC差距过大，normalization还有个内参蛋白参考。建议送样前跑胶定量。DTT，IAA的母液可以使用10mM-50mM的NH4HCO3溶液，也可以用水配母液。具体工作浓度varies a lot by studios,自查JPR或者MCP文章。IAA注意避光配置，避光孵育，不宜反应时间过长。 DTT,IAA做还原烷基化，作用浓度没有过于严苛的要求。组学你要是不熟悉，操作你全程进口试剂EP管，防止内衬污染。这个分泌型蛋白差异表达不好搞啊，这个实验的顶层设计有没有问题？你这种情况适合直接和质谱系统联系。