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问
免疫磁珠分离细胞,是否要经过封闭?
西柚味的芋圆
一般不封闭吧,我是严格按照说明书的步骤来的,用的美天妮的磁珠分选,但是分选成功后,检测纯度的时候可以封闭
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问
过程中发现有的小鼠炸毛有的没有炸毛,不知道这是什么原因?
dxy_zutyknhe
可能是抗原毒性引起的,一般跟免疫效果是没有直接关系的,炸毛可能是小鼠身体不太好吧
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问
请问流式细胞术单抗直接荧光需要几种对照?
dxy_zutyknhe
先确定你用的直标抗体的荧光染料,然后确定该抗体的来源总属,选择相应的同型对照
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问
为什么做了两次免疫组化鉴定细胞都呈现的是黑色的?
dxy_zutyknhe
可能是没有进行固定和破膜,也要注意是不是贴片反了
11 回答
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问
检测细胞中叶绿素的绝对值计算问题
西柚味的芋圆
感觉不太行,为啥不用液相色谱或者别的方法。一定要测的话,可以,用特定浓度的标准品用流式跑标准曲线进行检测
4 回答
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问
多组实验下想根据OD值计算样本浓度,应该如何计算?
莹啊免疫啊
按每组的算,每组都可能会有不同阴阳对照的值,不能完全统一
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问
关于小鼠肾脏冰冻切片直接免疫荧光问题2
莹啊免疫啊
冷丙酮固定10min.染色后-20保存,能放一个月,特别长时间的话,不然用石蜡?
9 回答
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问
流式细胞仪如何实时监测胞内钙内流?
西柚味的芋圆
把横坐标设置为为时间,纵坐标做为线性荧光强度。先上样跑一小会儿,然后不操作软件,取出样品管加入离子霉素混匀,再收集一小会儿,可观察到往上走的曲线
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问
用 HeLa 做自噬, LC3ii 型的变化不怎么明显,怎样才能做出有差异的图像?
西柚味的芋圆
免疫荧光染的是会同时染LC3I 和II 的,这种方法也没问题,在正常细胞和受刺激的细包中都会有LC3的光点,二者的区别是受刺激的成团块状,正常的呈散点状。。。在一些可能会影响LC3的翻译的条件下,可能受刺激的细胞表现为光点也会变多,这个好理解。。。而在自噬基础水平比较低的状态,给了刺激可能也看不出太大区别时可以考虑转染,相当于给个放大镜,放大这一过程。。。 这是我这个课题结题之后重新审视这个问题得
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问
凋亡分析处理细胞时大部分细胞都处于pi坐标的负轴是什么原因?如何处理?
西柚味的芋圆
电压太低了,你做的时候一定要用单染管去调好电压
18 回答
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问
瞬时转染目的病毒及空载病毒测OD值的问题
西柚味的芋圆
肯定不会,,检测时的激发光的波长完全不一样,所以没有干扰
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问
Elisa中间接elisa和直接elisa到底是靠什么区别的?
西柚味的芋圆
直接法(direct ELISA) 将抗原直接固定在固相载体上,加入酶标记的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。 优势:操作手续简短,因无须使用二抗可避免交互反应。 缺点:试验中的一抗都得用酶标记,但不是每种抗体都适合做标记,费用相对提高。 间接法(indirect ELISA) 此测定方法与直接法类似,差别在于一级抗体没有酶标记,改用酶标记的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量
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问
用冰冻切片做免疫荧光的抗体选择问题
颜渊溪桥
能做细胞免疫荧光的一般都可以,抗体上会写IF,但有时候抗体上不写也可以试试,但特异性很重要,要做好isotype对照
8 回答
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问
染色后发现 FITC 荧光全部在胞浆内是什么原因?如何进行实验步骤?
西柚味的芋圆
有的抗原收是膜抗原,比如说某些CD分子,但是,实验中发现,胞浆中也有,是不是因为该蛋白表达过程中,需要中胞浆转运到胞膜,所以,实验中发现胞浆中也有荧光
7 回答
484 围观
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问
石蜡切片的免疫组化,抗体只标明可做免疫印记,免疫荧光,是否可以做免疫酶技术?
西柚味的芋圆
Elisa应该是不行的,一般做wb的抗体我有尝试去做荧光和组化可以勉强做出来。但是很少很少可以用来做elisa
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564 围观
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问
除了流式细胞仪pi法还有有哪些实验可以检测细胞周期?
西柚味的芋圆
好像有跟周期比较密切的一些蛋白,Ki67、PCNA可以看下
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问
怎样用流式细胞仪来鉴定小鼠BMDC?
西柚味的芋圆
这个BMDC是从小鼠骨髓冲洗出来的细胞,在体外用IL4和GM csf1刺激七天培养行成的细胞吗?单纯看纯度的话,我觉得 CD11c就可以了吧
8 回答
3213 围观
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问
Elisa标曲问题
西柚味的芋圆
你看一下试剂盒推荐用哪个拟合方式,不同的试剂盒会不同。可以直线,可以曲线的
9 回答
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问
抗体非还原胶显示多种状态,怎么判断活性占比,如何更好分离?
peaceful13
不同条带的区别主要是分子量大小的不同~想要的组分需要了解你的目标抗体的分子量大小通过marker的条带去确定该分子量位置,如果纯化效果不佳~可以考虑一下protein G
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1064 围观
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问
流式细胞周期模型 RMSD 值为什么这么大?
dxy_0mxazdaw
这个与你流式电压调的太大有关系。另一方面,加入的染料或者抗体浓度有可能过高,建议新买的抗体或者染料做一个梯度稀释,寻找到最合适的染色浓度。
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