石蜡切片免疫荧光背景很脏什么原因？怎么办？
丁香实验
石蜡切片免疫荧光背景总是有洗不掉的非特异荧光，在一抗和二抗后都已经充分洗过（undefined10min）但背景仍然很脏，目的蛋白没有信号 
16 个回答
颜渊溪桥
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建议先看下抗体是否适合做免疫荧光，另外可以染个DAPI聚下焦，操作过程除了洗和封闭外，抗原修复步骤需要改善，可以试下不用 H2O2阻断。
西柚味的芋圆
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这个我们实验室的老师特别强调过。最后一步，封片之前，可以用ddH2O代替，pbs来洗二抗再进行封片
lyang556
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多为自发荧光的原因。要缩短固定时间，减少醛类固定剂与胺和蛋白反应生成的荧光产物，染色前应延长去除石蜡的时间。
peaceful13
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建议做抗体稀释与滴定～吸取抗体的时候，尽量离心再取抗体上清夜～再者确认一下二抗是不是会直接和样本结合
zgx3876
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1、可能抗体浓度高，也可能抗体非特异性结合，可以做几个浓度梯度试试 2、可能样本自发荧光，可以买个IgG作对照 3、有可能抗体质量不行
dxy_0mxazdaw
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一方面是洗的不干净，建议增加洗的时间;另一方面，既然涉及到抗体，就一定要封闭非特异性染色，所以建议增加封闭液浓度和时间。
parallelgmf
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这个点点看着像是脱蜡的时候没有脱干净。
二狗Echo
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1. 减少自发荧光：切片尽可能薄，采用高品质的多聚甲醛固定减少普通甲醛的自发萤光； 2. 洗涤充分多次少量，5miundefined5次，延长封闭时间，滴定一抗（稀释）浓度减少非特异性染色； 3.做好阴性对照，调节软件扣除背景。
咸水鱼rain
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石蜡切片需要抗原修复，请问你是经过抗原修复后再染色的吗？一般做免疫荧光用冰冻切片，石蜡切片做组化
CXCR3
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在操作的过程中要保持片子的湿度，如果片子上的组织干了，会产生很强的自发荧光。一抗敷育的话，可以4℃过夜，可以降低背景。染完片子封片后，尽量4小时内拍片，太久了也影响荧光。可以染一个阳性对照看看抗体是否有问题。
AnnaGQTP
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1.用非特异性蛋白封闭 2.抗体的量是否过量 3.做好对照
小破孩YG6Z
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可能在孵育一抗片没有没有我封闭好，换种封闭液或者延长时间；或者有可能二抗非特异性结合，可以做个空白对照（不用一抗，只用二抗）；组织切片有点过厚，切薄点；可以使用共聚焦显微镜看，效果更好
莹啊免疫啊
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可以用高质量多聚甲醛固定，减少普通甲醛自发荧光，切片厚度减薄，切片贴片后流水冲干净减少杂质荧光，一抗二抗漂洗干净，再控制曝光时间和注意暗室操作
dxy_4y8zumb0
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抗原封闭不完全，导致背景很高。购买高质量的抗体。调整一抗二抗的浓度和孵育时间。
dxy_b4qu25j6
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确认没有自发荧光的情况下，考虑一下封闭好了吗？可以换一种封闭液试试。如果封闭没问题的话那是不是二抗有非特异性结合，如果一直都按照同样的步骤做不出来，可以先一个步骤一个步骤的排除，而不是一直单一的重复
txs900416
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主要考虑封闭不到位，非特异性结合
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