实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问分选CD4 CD8细胞之后死细胞太多了，有什么方法可以保护细胞的活性吗？

dxy_29k93ve4

分离细胞的时候可以加2% 的FBS,MACS分选的时候可以降到0.5% 给他一点营养，别让他饿着

11 回答528 围观

问磁珠分选T细胞该选什么柱子？

dxy_29k93ve4

一般根据细胞数选用的柱子，每种柱子能挂的细胞数不一样

10 回答747 围观

问分选后共培养会有影响么？MLR怎么做？

西柚味的芋圆

磁柱本身是不带磁性的。 2、T细胞需要新鲜最好 3、有IL-2可以，没有也行，T细胞培养基中最好有2-ME

7 回答769 围观

问磁珠分离时出现堵柱现象怎么办？

pppeachya

细胞悬液用 300 目滤网过滤一次，过柱前重悬细胞时再加大液体体积试试～

22 回答2439 围观

问除了流式细胞仪pi法还有有哪些实验可以检测细胞周期？

西柚味的芋圆

好像有跟周期比较密切的一些蛋白，Ki67、PCNA可以看下

8 回答728 围观

问怎样用流式细胞仪来鉴定小鼠BMDC？

西柚味的芋圆

这个BMDC是从小鼠骨髓冲洗出来的细胞，在体外用IL4和GM csf1刺激七天培养行成的细胞吗？单纯看纯度的话，我觉得 CD11c就可以了吧

8 回答2574 围观

问Elisa标曲问题

西柚味的芋圆

你看一下试剂盒推荐用哪个拟合方式，不同的试剂盒会不同。可以直线，可以曲线的

9 回答601 围观

问抗体非还原胶显示多种状态，怎么判断活性占比，如何更好分离？

peaceful13

不同条带的区别主要是分子量大小的不同～想要的组分需要了解你的目标抗体的分子量大小通过marker的条带去确定该分子量位置，如果纯化效果不佳～可以考虑一下protein G

5 回答845 围观

问流式细胞周期模型 RMSD 值为什么这么大？

dxy_0mxazdaw

这个与你流式电压调的太大有关系。另一方面，加入的染料或者抗体浓度有可能过高，建议新买的抗体或者染料做一个梯度稀释，寻找到最合适的染色浓度。

6 回答2629 围观

问病毒感染可以做MTT吗？

西柚味的芋圆

可以用cck8 做吖，做起来比较简单。就是加板子比较废眼睛。MTT也可以，但是没有CCk.8简单吧

9 回答530 围观

问流式细胞术测不同浓度LPS刺激12h后RAW264.7 ，ROS 结果分析问题

西柚味的芋圆

你做这个的时候有没有用考虑到自发性荧光的影响。同时巨噬细胞类的检查需要先孵育Fc

9 回答3750 围观

问关于小鼠肾脏冰冻切片直接免疫荧光问题1

西柚味的芋圆

当然需要罐洗，我一般用4百分之四的多聚甲醛进行罐柱

8 回答561 围观

问免疫细胞化学检测采用SP法和SABC法的结果为什么不一致？

西柚味的芋圆

那只能重新检测一下标本，同时做俩种方法，确保所用的一抗识别同一克隆位点

7 回答478 围观

问请问elisa实验中，空白、阳性对照、阴性对照均显色，可能是什么原因？

西柚味的芋圆

那肯定是你洗板子没有洗干净。或者你在加样的过程中导致标准品漏了

6 回答512 围观

问将酶免疫技术中的间接法改为一步法合理么？

peaceful13

可以的～主要是一步法的检测灵敏度会比较低，

8 回答679 围观

问流式细胞技术测定细胞内游离钙浓度为何要使用氯化钙？

peaceful13

主要为了保持缓冲液的钙离子浓度～避免影响最终实验结果，因为胞内外离子浓度差异较大～会快速引起钙离子的变化

7 回答454 围观

问Elisa数据负值怎么才能做出正的来？

西柚味的芋圆

blank孔是否污染了吧样本是否浓度是否在曲线范围之内3 、板子是否脏？导致孔与孔之间不一致

8 回答520 围观

问请教ELISPOT斑点模糊问题

西柚味的芋圆

我的推测是包被的抗体的问题。你这个我自己包被的时候遇到过，但是已经包被好的板子这样的话，不知道原因，是不是没洗干净呢，洗板液要用PBS不能用PBST

4 回答746 围观

问怎么定阴性对照？及阳性cut-off值呢？

CXCR3

阴性对照可以是空白的对照，不加样品。阳性对照在没有样本的情况下我们会根据说明书的的结果。

9 回答890 围观

问组织免疫荧光失败问题

西柚味的芋圆

可能是二抗保存不放。这种散在的光点就要看你的洗液了，最后一步封片之前要用去离子水而不是pbs洗，这些非特异性的光点可能是离子染色导致的

8 回答821 围观

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