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实验问答

27,532,746 科研人在看

问用于反转录PCR的RNA浓度范围是？

xiadongliang

反转录问题应该不大，1ug的RNA template实在是太多了。去哪儿弄那么多做反转录啊。可能是你设计的引物不太好，扩增存在非特异性条带。

1 回答1705 围观

问提取RNA后反转录跑PCR电泳阳性对照没有条带？

水行船

阳性对照是什么，整个实验流程描述一下，信息太少了题主：阳性对照是FLAG ，DSP但是一条带都没有，是不是我提RNA，或者是反转录哪里出问题了，求解。

2 回答793 围观

问如何选择反转录PCR的内参？

cloud-clone

你的内参选择稳定是兔抗鸡GAPDH或B-ACTIN的抗体了。内参抗体实质就是一个一抗。

2 回答949 围观

问如何快速定位污染的方法？

丁香实验

靠近风口的位置，还有就是有水的地方永远是首要排除的位置。重点怀疑水浴锅和培养箱内的水盘是不是有细菌/霉菌滋生。还是要事先做好细胞实验室布局设计，优化和规范细胞操作流程，提前查缺补漏，才不至于发生污染后，无从下手找到原因。

1 回答627 围观

问细胞培养背景发现移动的小点，是细胞污染？

SJ多可爱

有可能是细菌污染吧？后期培养液浑浊了吗？题主：没有浑浊，现在查了很多，还是怀疑黑胶虫污染，使用了黑胶虫清除剂好了很多使用黑胶冲清除剂后期还能见到会动的小黑点吗？题主：会少些，一旦停用就又会有我养的时候，细胞密度长到接近百分之90的时候，就基本上很少见到黑点，不影响细胞状态，没啥问题，细胞增殖没有问题，形态也没有问题，不必太在意这个黑点的，我见过好多养细胞都有这种会动的黑点，细胞生长不受影响，

2 回答1139 围观

问细胞污染及解决方法

yj1984ren

这两张图到处都有了，结合楼主提到的细沙样，就要考虑细菌污染了。

3 回答930 围观

问实验动物饲养密度

soso2007

我一般按照标准一个笼子里养3只，笼子大约是4undefined5undefined40，具体我也没有量过。而一个房间可以养多少只，这个就不知道啦。

3 回答1967 围观

问细菌培养问题

雕刻者

液体培养基和摇床应该都没有问题，因为我准备感受态（同样菌株）时就是用同样的液体培养基（就是不加AMP）和摇床的，感受态细菌长得很好，还有我做了阴性对照，没长细菌。这些问题我以前也考虑过。LB-AMP固体转到LB-AMP液体中的细菌主要问题是细菌生长不良，我现在用固体平板上转种2－3代（挑取生长较快的较大的菌落）后最后挑取较多的细菌转种到液体培养基中，液体培养基中的生长的细菌量增加了。但是液体培养基

5 回答1673 围观

问请教细菌培养是否污染？

鱼小

我的判断是：1、没有染菌。2、同一条链上大小不一很正常，我很多实验都是这样。这个和菌种、生长时间等都有关的。3、那些非常小的应该是刚分裂出来的。4、枯草杆菌一般都不是成链状的，不过我有几次摇瓶出来染色后也成链状。5、真的感觉没有染菌，可以做做16s rna鉴定！

3 回答801 围观

问直接提取DNA的电泳图发现有两条带，且与目标大小不一致

猪美美的小蘑菇

你的marker是多大的，如果marker使用没有错误的话，下面两条带看着像引物二聚体

2 回答1097 围观

问曝光后膜全黑，不知道是什么原因？

此用户已注销

问题已经解决了，是一抗和二抗浓度过高了

2 回答1925 围观

问做出来的有差异表达的蛋白，又做了一批用WB的无差异？

Du杜杜杜

p 0.03，这个值很大的了，假阳性率很高，一般至少都是p＜0.05.蛋白质组学是一个非靶向的实验，并不是一个靶向实验，所以有假阳性的结果是很正常的，即使验证也是选取的P值较小的，且FC值变化较大的。

2 回答866 围观

问小鼠心脏采血要麻醉吗，能采多少？

丁香实验

用1ml一次性注射器先抽取血液，再转入含有肝素的取血管中即可，此操作过程没有发生凝血现象。但产生了严重的溶血，不知其原因，望不吝赐教。

1 回答1092 围观

问想分离支原体不知如何选择培养基？

丁香实验

利用葡萄糖的支原体：肺炎支原体----支原体肉汤培养基；利用精氨酸的支原体：口腔支原体、唾液支原体、人型支原体----精氨酸支原体肉汤培养基；利用尿素的支原体：T 株支原体 (解脲支原体)—--解脲支原体培养基鸡毒支原体------改良 Frey 培养基用于固体培养时：以上支原体都可以接种于支原体琼脂培养基上。

1 回答1085 围观

问免疫共沉淀coip的对照问题

晓柒SQJZ

从您的这个结果来看，蛋白A的检测系统没有work，检查Anti-A抗体的用途，是否是WB，IP通用的抗体，有些抗体只能识别线性表位或只能识别空间表位

2 回答911 围观

问免疫共沉淀中珠子预吸附和IgG的问题

丁香实验

你这边所说的非特异性蛋白大致可以理解为能够与protein A琼脂糖珠结合的蛋白；包括能与protein A结合蛋白和与agrose结合的蛋白。这样做毫无疑问会降低非特异结合，但是也要考虑到这一步的局限性：1、是有可能把目的蛋白拉下来的，因为有些蛋白确实会跟proteinA结合，你恰好是做这这样的蛋白就有可能出现这个情况。2、这种方法也没办法把所有非特异结合蛋白去除，所以也不用担心把你的目的蛋白拉

1 回答316 围观

问AAV病毒纯化方法及感染细胞的实验方法，及相关注意问题？

丁香实验

AAV的纯化1）向病毒浓缩液中添加固体 CsCl 直到密度为1.41 g/ml（折射率为1.372）；2）将样品加入到超速离心管中，用预先配好的 1.41 g/ml CsCl 溶液将离心管剩余空间填满；3）在 175,000 g 下离心24 小时，以形成密度梯度。按顺序分步收集不同密度的样品，取样进行滴度测定。收集富集有AAV 颗粒的组分；4）重复上述过程一次。5）将病毒装入100 k

1 回答1454 围观

问病毒做TCID50确定滴度的问题

丁香实验

如果有cpe而没有荧光，应该修饰区域的丢失。我之前遇到过这种情况。

1 回答1133 围观

问为什么病毒纯化中peg6000沉淀不能溶解？

丁香实验

自己做个结论，是资料上使用的离心机和我使用的离心机不一样，我使用的相同转速，离心力要大于资料上的，在做了离心力换算，调整转速后，问题解决了。所以，以后看见资料上写转速的，一定要小心了，很可能就是一大坑。

1 回答2358 围观

问关于RNAi转染效率的问题

丁香实验

不知道你是采用反义核苷酸还是siRNA，是直接导入anti－sense或者siRNA片段还是采用构建干扰质粒的方法，如果是直接导入寡核苷酸片段，只能采用特定的干扰转染试剂，推荐Ambion公司的转染试剂，如果是构建的干扰质粒，则可以采用质粒通用转染试剂，比如罗氏的FuGENE 6，效果不错。上述两种试剂都可用于普通质粒转染，优点是操作程序简单，尤其是Ambion的细胞毒性小。我做过许多细胞株，包括

1 回答926 围观

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