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问
保存细胞的细胞冻存管在使用之前需要灭菌吗?
赵小叶
冻存管没有开封之前应该都是无菌的哦 如果盖子开了就别用了吧 不能高压灭菌重复使用
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问
有关细胞冻存后 - 80℃保存的问题
biopic
老老实实按照标准操作,存液氮里面。就不会出这种问题。
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问
细胞冻存液是否对细胞贴壁有影响
好假哟00
不知道你复苏培养使用什么规格的瓶子,因为商品化冻存液中应该也有 DMSO,对细胞影响较大的也是这个成分。足量的稀释可以降低他的毒性。
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问
细胞冻存液污染了,细胞怎么办
Doctor高1
如果冻存液污染,那你冻存的细胞肯定也被污染了,只能丢弃,因为污染的细胞你花时间金钱去补救,结果都差强人意
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问
流式细胞周期结果没有S期,是什么原因
笑嘎嘎
如图:
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问
流式细胞仪跑出的图流式细胞图分群不明显怎么办?
Ethan2007
又仔细查了下资料,分群不明显还有可能是抗体的荧光强度较弱,可选用强荧光的抗体。另外,在染色时,抗体的加入量不合适也可能造成分群不明显。可以考虑做一个浓度梯度,以找到合适的抗体浓度。
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问
流式细胞术检测GFP转染的效率相关问题
amethyst2003
一般的话流式检测的细胞数是10000-20000,具体看参数设置了,建议用PBS重悬,一般是不需要固定的,检测所用为第一通道,单色荧光不难的,做一次就知道了。好运哦
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问
提取的蛋白保存后没有凝固呈水状的原因
是小杨同学
我觉得有可能是污染了,或者是冰箱温度的问题,建议放在-80°C冻存呢
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问
包涵体的纯化相关问题
dxyhsx123
先破菌,去上清,在洗涤,再用尿素溶解。一些浓度和时间,根据实验进行摸索。
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问
链霉亲和素融合蛋白的离子交换纯化相关问题
是小杨同学
我觉得可能标签有点问题呢,可以换一个标签试一下,或者我觉得可以在蛋白与标签之间加一个酶切位点,在过离子交换之前把标签给切掉
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问
如何比较不同实验组蛋白的岩藻糖基化水平
dxyhsx123
可以做质谱啊,这个是目前比较多的,经费充足,质谱带你起飞。
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问
蛋白结合为什么荧光公定位能做出来免疫共沉淀不行?
是小杨同学
我觉得可以试一下加大样本量呢,沉淀的蛋白量可能有多少,然后可以试一下优化ip条件
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问
coip的对照相关的问题
是小杨同学
我觉得可能是input的浓度有点低了呢,或者是抗体的问题,如果是抗体的话可以跑wb去验证一下
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问
条带宽度不一样目标蛋白性状奇怪并且拖尾严重的原因
dxyhsx123
上样的孔径是否均一,浓缩胶和分离胶比例是否合适,是否混匀,有无气泡,跑胶电压和速度等方面调整。
35 回答
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问
免疫印迹中显色问题
是小杨同学
一般来说抗体的大小亚基是不会显色出来的吧,可以降低一下抗体的浓度试试
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问
目的蛋白出的来,内参出不来的原因?
jey1235
首先建议所有的WB出现问题的都通通出一遍全PAGE的图。因为你剪过之后条带异常根本无法判定是膜的问题还是抗体或者操作的问题。从这个图来看,有可能是样品自身问题,是否出自同一种类细胞,上样量对比?内参既然能出来一两条带,基本判定抗体没问题,问题就在样品上,建议奥一下SDS-PAGE染一下蛋白,看看样品之间是否有差异?第二张图,出来半截的条带,注意下样品是否电泳电压高,或者转膜时间过久,小蛋白比较容易
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问
用于反转录PCR的RNA浓度范围是?
xiadongliang
反转录问题应该不大,1ug的RNA template实在是太多了。去哪儿弄那么多做反转录啊。可能是你设计的引物不太好,扩增存在非特异性条带。
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问
提取RNA后反转录跑PCR电泳阳性对照没有条带?
水行船
阳性对照是什么,整个实验流程描述一下,信息太少了题主:阳性对照是FLAG ,DSP但是一条带都没有,是不是我提RNA,或者是反转录哪里出问题了,求解。
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问
如何选择反转录PCR的内参?
cloud-clone
你的内参选择稳定是兔抗鸡GAPDH或B-ACTIN的抗体了。内参抗体实质就是一个一抗。
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问
如何快速定位污染的方法?
丁香实验
靠近风口的位置,还有就是有水的地方永远是首要排除的位置。重点怀疑水浴锅和培养箱内的水盘是不是有细菌/霉菌滋生。还是要事先做好细胞实验室布局设计,优化和规范细胞操作流程,提前查缺补漏,才不至于发生污染后,无从下手找到原因。
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