目的蛋白出的来，内参出不来的原因？
丁香实验
在将对照组和实验组蛋白浓度调一致后，跑WB。结果目的蛋白跑的出来，内参出不来，三次一样的情况，有一次，内参只出来半边。想知道原因及如何解决？
目的蛋白
内参β-actin
一开始怀疑内参有问题，换了内参，依然出不来，一次跑出来了半个内参
32 个回答
是小杨同学
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我觉得可能是转膜不均匀，内参没有转上，如果不是转膜的话建议检查一下抗体
dxyhsx123
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内参更换全新的试一试，另外转膜时，注意一下内参那边的贴合。最后，剪裁的大一些。
dxy_pggo2lp2
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非常有可能是转膜的问题，我之前做的时候，只有一半浸在转膜液中，出现的效果和你这个一样。
lzy必有我师
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1.转模板不平整，在内参的位置结合不紧密，导致内参蛋白没有完全转到膜上，可换平整的板试一试；2.抗体结合力较差，换个批次或者公司的试剂试一试；3.转膜时间不够或者过长，导致内参蛋白没能完全转到膜上或者转出膜外，
医往情深丁香园
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样品中有杂质，但是那样的话你的目的蛋白条带也会受到影响
dxy_bq4uxnd
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如果内参出不来，可以尝试更换内参，我们也出现过gapdh孵不出来，但是换成actin就有非常漂亮的结果了
一支肾上腺素
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转膜不均匀，内参没有转上，重新转膜一下试试。
JCorona
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1.转模板不平整，在内参的位置结合不紧密，导致内参蛋白没有完全转到膜上，可换平整的板试一试；2.抗体结合力较差，换个批次或者公司的试剂试一试；3.转膜时间不够或者过长，导致内参蛋白没能完全转到膜上或者转出膜外，调整时间试一试
内科小护士
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由你的结果来看，问题应该是在抗原抗体反应及之后的步骤了。一般内参都非常容易出，内参条带应该非常明显，比较宽的。如果你的内参条带都不太好，也不能肯定目的条带就没有，可以想想曝光方面的原因。
水深先试浅
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能出来那次我看着挺正常的，说明不是抗体的问题，有可能是你的样品问题，重提蛋白看看吧
dxy_9kptsiw
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建议不剪裁孵育内参，再看看内参表达
其次明确自己做的实验是否会影响内参表达，更换适合内参
兔子爱吃鱼
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首先考虑是抗体的问题，不知道你的目的蛋白多大分子量，会不会转膜转过了，内参转没了
dxy_qkedgrg7
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可能是内参抗体不好，换个公司或换个其他的内参，看你的样品最适合的内参是哪个
小白野蛮成长
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如果是一抗回收太多次的话建议重新配抗体
dxy_rlratyf3
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你这个内参条带的形状也有问题，换了内参依旧有问题可能是由于内参条带附近的凝胶不均匀。或者是样品中有杂质，但是那样的话你的目的蛋白条带也会受到影响。
dxy_h7vcp8v3
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从胶图来看，其一可能是内参转膜的时候没有转好，检查转膜过程及时间；其二可能是内参样品没准备好，建议检查内参样品准备过程；其三，可以增加内参的上样量，再次检测。
ZZDX-YILILI
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1.内参蛋白分子量少，转膜有可能转过了。
2.确定下实验的一抗和二抗是否匹配。
3.参考下课题组其他小伙伴近期实验内参有问题，也可以让他们帮你跑下样本。看是否是自己实验过程操作有问题。
dxywode
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第一，应该确认每个样品表达GAPDH的量一样，虽然是持家基因，本人觉得不同细菌可能表达量不一样，造成信号强弱不一样。可以通过考马斯亮蓝染色来确定上样量的差异，调整上样量一样再检测GAPDH。第二，内参跑不齐。一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。第三，PAGE胶的制备也很关键。看到条带信号连在一起，一方面因为胶不好，样品扩散，另一方面蛋白表达量高，曝光时间长。第四，转膜的效率会不会是不一致的，一抗、二抗的接合GAPDH不好。都有可能。
于小闹0808
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感觉胶没配匀，或者转膜的问题，你可以根据你的实验物种和实验类型找下相应的抗体
jey1235
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首先建议所有的WB出现问题的都通通出一遍全PAGE的图。
因为你剪过之后条带异常根本无法判定是膜的问题还是抗体或者操作的问题。
从这个图来看，有可能是样品自身问题，是否出自同一种类细胞，上样量对比？
内参既然能出来一两条带，基本判定抗体没问题，问题就在样品上，建议奥一下SDS-PAGE染一下蛋白，看看样品之间是否有差异？
第二张图，出来半截的条带，注意下样品是否电泳电压高，或者转膜时间过久，小蛋白比较容易转出去。
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