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        用于反转录PCR的RNA浓度范围是?

        相关实验:RNA 反转录

        user-title

        PCR的小女孩

        最近在用 大脑组织提取total RNA,用的是Qiagen的Rneasy mini kit试剂盒;
        做完后用nano drop测得浓度是14.4ng/ul,A260为0.359,260/280为2.56。

        然后。。用 5ul的RNA进行RT-PCR,引物是自己设计的,用的是Takara的one step试剂盒(由于本人菜鸟,离不开试剂盒啊,烧钱。。)
        试剂盒上是说用1ug的RNA template,但是RNA浓度实在太低了,只加了5ul

        最后,凝胶检测,结果如图:
        最右为marker,每条带间距100bp,
        左一是前两天RT-PCR出来的,第一次跑的时候还是有条带的,现在竟然没有了。。
        左二、左三;左四、左五;左六、左七 是使用针对同一条基因设计的两对引物 P出来的。
        从这张图里,大侠们能看出什么问题吗? 我应该做哪些改进?图片描述

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        1 个回答

        user-title

        xiadongliang

        有帮助

        反转录问题应该不大,1ug的RNA template实在是太多了。去哪儿弄那么多做反转录啊。
        可能是你设计的引物不太好,扩增存在非特异性条带。

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