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实验问答

27,535,744 科研人在看

问树突状细胞培养需要什么条件？

dxywode

在倒置显微镜下观察细胞生长状态：如果没长满，将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培养液，继续培养。如果细胞已经长满（约80%-90%）则传代后继续培养。

4 回答1397 围观

问外周血单个核细胞分选方法的比较

dxywode

免疫磁珠细胞分选法是把细胞用超级顺磁性的(MACS微型磁珠)特异性地标记，磁性标记完后，把这些细胞通过一个放在强而稳定磁场中的分选柱。分选柱里的基质造成一个高梯度磁场。被磁性标记的细胞滞留在柱里而未被标记的细胞则流出。当分选柱移出磁场后，滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来，这样就完全可以获得标记和未标记的两个细胞组份。

3 回答912 围观

问如果上样量超载，要用什么样的方法增加上样量？如果需要加大上样量使原来弱的条带能看清楚？

府宅

柱超载法，通常指在分离条件不变的基础上增大进样量。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。超载进样的程度取决于分离情况。超载一般分为体积超载和浓度超载。

3 回答530 围观

问跑胶跑成斜线，是胶的问题还是电流的问题

wuli猫宁

胶带跑偏的调整工作，应在空载运转时进行。一般从机头卸载滚筒开始，沿着胶带运行方向，先调整回空段，后调整承载段。调整时，应在一侧进行调整，切勿两侧同时调整，并且一次调整的幅度不能过大，要根据胶带运转情况适当调整。

4 回答584 围观

问肿瘤蛋白疫苗为什么要加强注射一针？

Kimser

疫苗的作用就是增加其含量，含量之所以少也是通过检测，原因在于消耗速率和起始浓度。

10 回答656 围观

问ELISA中用到的试剂都是哪些?

lzy必有我师

1、包被缓冲液：0.05mol/L，PH9.6碳酸盐缓冲液（CBS） Na2CO3 1.59g NaHCO3 2.93g 加去离子水水至900ml，调pH值到9.6,定容到1000ml。121℃，0.1MPa高压灭菌20min后，室温贮藏。 2、磷酸盐缓冲溶液（1×PBS）：0.01 mol/L、pH7.4 NaCl 8.0g KH2PO4 0.2g KCl 0.2g Na2HPO4·12H2O

6 回答1351 围观

问吸附抗体的选择，非稀释，稀释？

dxywode

选择抗体应先了解其反应谱和适用条件（包括适用切片、稀释度及温育时间等）。使用一种新抗体时，必须首先摸索出最佳浓度，所谓最佳浓度就是能获得最佳特异反应所需抗原的最低浓度。或者按照有关说明书的提示。二、稀释1.一般用0.01MPBS，PH值7.2；2.或用0.05MTBS，PH值7.6；

5 回答629 围观

问为什么细胞培养需要用到血清？

bqejjh123

加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。

4 回答1673 围观

问做wb实验每次只加一种一抗，可以同时加两种或者多种一抗的吗？

bqejjh123

最好不要，根据抗体而定，只是基础成分一般都是TBST或PBST。抗体说明书会写到底加BSA还是NF-MILK。有钱还可以买专用稀释液，特异性进一步降低，成分可能包括人工合成的肽、明胶、酪蛋白、多糖类等。

3 回答5556 围观

问二抗敷完了发现敷错了，怎嘛办?

bqejjh123

如果敷错了，可以洗一下再敷，不然二抗会污染

4 回答4296 围观

问大部分抗体收到后4 度短暂保存1-2 周对抗体活性有没有影响？如果抗体很快(1-2 周)会使用，推荐在如何保存？

府宅

试剂盒中的抗体和酶在4度可以放半年

3 回答2064 围观

问目前有耗尽型T细胞的抗体吗？

dxy_gwrp7ndq

免疫T细胞彻底耗竭与DNA甲基化过程有关

3 回答537 围观

问大家进行细胞给药时，加血清吗？一般正常条件是不是给药都加血清啊？

dxy_gwrp7ndq

还是要看你的细胞种类的，有些细胞生长比较好，并且药物作用时间短可以不加血清的。一般我都是加含5%的血清的。肯定不能等细胞长满板子才加

3 回答4298 围观

问关于免疫荧光细胞效率的问题

府宅

内源性原因就是你的细胞长的太密了。外源性可能是你转染造成的。还有可能更你做一抗二抗有关。

3 回答458 围观

问免疫荧光染色背景过亮该如何改进？

府宅

封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合，减少背景染色。如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间

3 回答1536 围观

问关于chip-seq或者cut-tag的问题

府宅

ChIP-seq可以不设置生物学重复；如果设置生物学重复，要尽可能增加重复个数。

3 回答1052 围观

问免疫共沉淀检测到蛋白信号弱的原因是什么呢？

府宅

抗体浓度太低，应对措施：调整抗体浓度，必要时设立浓度梯度，摸索最佳浓度；

2 回答651 围观

问免疫共沉淀的相关问题

dxywode

在细胞裂完离心之后、加入抗体ip之前吸出来的细胞裂解液。可以在wb曝光时显示目的条带的位置以及比较不同泳道之间用于IP反应的细胞蛋白量。

3 回答596 围观

问做WB转膜时发现marker没转上，但是全程做完扫膜以后内参是有的，目的淡到约等于无是怎么回事儿？

dxywode

marker应该在转完膜孵育抗体之前就可以看到是否成功转至膜上了。在显影时，如果用的是带有CCD相机的仪器读取结果，目的条带读取化学发光信号，而marker要用明场单独拍摄；如果是采用压片，显影定影，则需要提前标记。

3 回答3046 围观

问做WB的时候加入抗体后条带出不来，要怎么快速判断出来是用的抗体有问题还是样本有问题？

dxy_gwrp7ndq

降低抗体浓度,增加二抗对照(不加一抗)。抗体未经纯化使用亲和纯化的抗体,减少非特异性条带。

3 回答646 围观

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