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保存细胞的细胞冻存管在使用之前需要灭菌吗?
赵小叶
冻存管没有开封之前应该都是无菌的哦 如果盖子开了就别用了吧 不能高压灭菌重复使用
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问
有关细胞冻存后 - 80℃保存的问题
biopic
老老实实按照标准操作,存液氮里面。就不会出这种问题。
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问
细胞冻存液是否对细胞贴壁有影响
好假哟00
不知道你复苏培养使用什么规格的瓶子,因为商品化冻存液中应该也有 DMSO,对细胞影响较大的也是这个成分。足量的稀释可以降低他的毒性。
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问
细胞冻存液污染了,细胞怎么办
Doctor高1
如果冻存液污染,那你冻存的细胞肯定也被污染了,只能丢弃,因为污染的细胞你花时间金钱去补救,结果都差强人意
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问
提取的蛋白保存后没有凝固呈水状的原因
是小杨同学
我觉得有可能是污染了,或者是冰箱温度的问题,建议放在-80°C冻存呢
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问
关于-80度冻存组织的核蛋白提取的问题
小布丁瑶瑶
可以的,结果可能会不同,减少-80度的时间,结果应该会更相近一些
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问
包涵体的纯化相关问题
dxyhsx123
先破菌,去上清,在洗涤,再用尿素溶解。一些浓度和时间,根据实验进行摸索。
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问
链霉亲和素融合蛋白的离子交换纯化相关问题
是小杨同学
我觉得可能标签有点问题呢,可以换一个标签试一下,或者我觉得可以在蛋白与标签之间加一个酶切位点,在过离子交换之前把标签给切掉
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问
蛋白质在透析过程中有大量沉淀的原因?
是小杨同学
有可能是因为PH值,温度等引起的沉淀,也有可能是蛋白本身就不太稳定容易沉淀,可以超声或梯度透析试试看
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问
如何比较不同实验组蛋白的岩藻糖基化水平
dxyhsx123
可以做质谱啊,这个是目前比较多的,经费充足,质谱带你起飞。
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问
蛋白结合为什么荧光公定位能做出来免疫共沉淀不行?
是小杨同学
我觉得可以试一下加大样本量呢,沉淀的蛋白量可能有多少,然后可以试一下优化ip条件
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问
coip的对照相关的问题
是小杨同学
我觉得可能是input的浓度有点低了呢,或者是抗体的问题,如果是抗体的话可以跑wb去验证一下
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问
CO-IP之后的蛋白质和磁珠分离的方法相关问题
小布丁瑶瑶
0.5-4微克/mg 总蛋白即可 一般抗体浓度都很高 1:200-1:500左右
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问
转膜后蛋白异常的原因?
是小杨同学
我觉得可能是电压有点高,导致蛋白质降解了,然后可以换个电转仪器试试看
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问
GSTpulldown诱饵蛋白不结合柱子怎么办?
小布丁瑶瑶
可能是标签包起来了,可以尝试变性纯化
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问
免疫印迹中显色问题
是小杨同学
一般来说抗体的大小亚基是不会显色出来的吧,可以降低一下抗体的浓度试试
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问
内参GADPH出现弥散,并且有两条条带是为什么?
是小杨同学
我觉得可能是你的蛋白降解了,然后出现了两条带,最好用新鲜的蛋白来跑胶呢
29 回答
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问
wb一抗和二抗去除液的原理是什么?
小布丁瑶瑶
可以试着用一下膜再生液,等洗好后,再曝光看下还有没有条带,没有就可以孵育新抗体了
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问
加入loading buffer煮沸后整个变红?
小布丁瑶瑶
可能是蛋白质酸性太强了,可以检测一下样品或ph值
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问
目的蛋白出的来,内参出不来的原因?
jey1235
首先建议所有的WB出现问题的都通通出一遍全PAGE的图。因为你剪过之后条带异常根本无法判定是膜的问题还是抗体或者操作的问题。从这个图来看,有可能是样品自身问题,是否出自同一种类细胞,上样量对比?内参既然能出来一两条带,基本判定抗体没问题,问题就在样品上,建议奥一下SDS-PAGE染一下蛋白,看看样品之间是否有差异?第二张图,出来半截的条带,注意下样品是否电泳电压高,或者转膜时间过久,小蛋白比较容易
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