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实验问答

29,006,230 科研人在看

问免疫荧光背景太强怎么解决

Kimser

封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合，减少背景染色。如果背景太强，可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。

4 回答4740 围观

问石蜡切片如何保持固定

师医生说

病理组织切片必须经过固定才能保证后续一系列的制作过程组织标本要在24小时内尽早的固定，最好是立即固定，越快越好，另外，固定液的选择要使用10%的中性缓冲福尔马林液。固定液的量必须大于标本体积的4倍以上固定的温度要保证，至少在24摄氏度及以上的环境中操作。在操作过程中，要保证酒精脱水和进水的浓度

4 回答1752 围观

问环状沉淀试验中，为何下层加特异性抗血清，上层加抗原？

小暮

从定义上看，因抗血清抗体浓度高，比重较抗原大，所以两液交界处可形成清晰的界面。此处抗原抗体反应生成的沉淀在一定时间内不下沉。一般在室温放置10min至数小时，在两液交界处呈现白色环状沉淀则为阳性反应。相应抗体只会与相应抗原结合，而先加抗原，抗原会与其他物质结合。这样充分特异性结合

3 回答714 围观

问白板显色步骤结束后，酶标板所有孔均无颜色是什么原因？

师医生说

在整个反应过程中有操作步骤错误，同时要检查是否试剂在有效期内，另外，要看显色液的AB液是否没有保存在避光环境中有失效现象。同时，要观察洗板过程中是否有清洗中高浓度的清洗液而导致包被的底物浓度不够，也不排除有其他的洗板过程中的消毒液影响

4 回答504 围观

问琼脂糖凝胶电泳中在规定的时间内没有跑出很好的条带，导致染色出现不清晰，分辨率不高的情况有哪些影响因素

府宅

1、DNA降解：琼脂糖凝胶电泳试验中要避免核酸酶污染2、电泳缓冲液陈旧：电泳缓冲液多系使用后，离子强度降解，PH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳实验，建议经常更换电泳缓冲液。3、所用电泳条件不合适：电泳时电压不应超过20V/cm，温度<30℃；巨大DNA链电泳，温度应该<15℃；检车所有电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力4、DNA上扬量过多：应减少凝胶中DNA上样量。5、DNA样含盐量过

3 回答1442 围观

问跳孔出现随机性的花板、跳孔现象是什么原因？

府宅

1.洗板机某几个加液头堵塞导致花板、跳孔。2.拍板时交叉污染。

3 回答833 围观

问Elisa显色相关问题

小布丁瑶瑶

不同试剂盒的组分混用或替代；稀释后的工作液浓度较高，可能是稀释前未离心或者取液量不准确

3 回答753 围观

问请问在免疫扩散法中，根据规程最好能先将血清（抗体）样本进行补体灭活处理后再使用，如果不灭活会有什么影响呢，灭活时有什么注意事项？

dxywode

免疫扩散法：先制备含Apo抗体的琼脂糖凝胶，间隔等距离打孔，加入待测人血清，水平置于温箱（37℃）保温24或48h，抗原从孔中间向周围扩散，因凝胶板中有相应抗体，经一定时间扩散后，医学教|育网搜集整理最后在凝胶孔周围形成一圆型沉淀圈，测量其圆直径，以圆的面积大小计算血清中Apo含量。该法要求在测量圆周大小时，一定要精确到0.1mm.这一测定方法可适用于以抗体为试剂贩所有微量蛋白的测定，但易受多种因

3 回答893 围观

问针对化学发光中使用的质控品是高浓度稀释比较好？还是选择各梯度的直接商品浓度比较好

yanxiaoyuhao

质控品是指将已知量的待测样品加入到生物介质中配制而成，用于质量控制。所以选择各梯度的会比较好

4 回答1465 围观

问肿瘤疫苗沉渣泛起的原因都有哪些？一定不能使用么？

府宅

疫苗中不溶于水的成分，以混悬液的状态存在。放置久了，瓶底会有少许沉淀，轻轻振摇后，沉淀会与悬液混溶。这是正常情况，不影响疫苗的使用。

3 回答512 围观

问细胞染色背景应该如何降低

府宅

内源性过氧化物酶和生物素在肝脏、肾脏等组织含量很高（含血细胞多的组织），需要通过延长灭活时间和增加灭活剂浓度来降低背景染色；

3 回答625 围观

问树突状细胞培养需要什么条件？

dxywode

在倒置显微镜下观察细胞生长状态：如果没长满，将培养瓶用75%酒精消毒后在超净台内更换新鲜培养液，继续培养。如果细胞已经长满（约80%-90%）则传代后继续培养。

4 回答1573 围观

问通过染色进行的细胞分选一直不太成功请问注意事项？

Kimser

样品应保存在最适合它们的富营养培养基中。一般建议血清浓度尽量高一些，因为在分选过程中，血清浓度会被收集到管中的鞘液稀释。收集管尽量保持在最佳温度，并含有用于保存细胞活力的培养基。在分选完成后尽快处理分选后的细胞有助于保持细胞活力。

4 回答1175 围观

问双荧光染色标记后细胞流式实验以及结果分析需要的注意事项?

府宅

每次试验均需设置以下三种对照：（1）阳性对照：阳性血清+荧光标记物；（2）阴性对照：阴性血清+荧光标记物；（3）荧光标记物对照：PBS+荧光标记物。

7 回答2117 围观

问外周血单个核细胞分选方法的比较

dxywode

免疫磁珠细胞分选法是把细胞用超级顺磁性的(MACS微型磁珠)特异性地标记，磁性标记完后，把这些细胞通过一个放在强而稳定磁场中的分选柱。分选柱里的基质造成一个高梯度磁场。被磁性标记的细胞滞留在柱里而未被标记的细胞则流出。当分选柱移出磁场后，滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来，这样就完全可以获得标记和未标记的两个细胞组份。

3 回答994 围观

问如果上样量超载，要用什么样的方法增加上样量？如果需要加大上样量使原来弱的条带能看清楚？

府宅

柱超载法，通常指在分离条件不变的基础上增大进样量。超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。超载进样的程度取决于分离情况。超载一般分为体积超载和浓度超载。

3 回答555 围观

问免疫组化一抗敷育时间的问题，越长越好吗？有的推荐说至少一小时，通常推荐3小时，避免造成假阴性，如果敷育过夜或者24小时会不会引

dxywode

一抗孵育条件包括孵育时间、温度和抗体浓度，三者之间是相对的关系。浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度而时间决定反应的量。一抗孵育温度有：4℃、室温、37℃，其中4℃效果最佳。至于孵育时间，这与温度、抗体浓度有关，一般37℃1-2h，而4℃则要过夜。其中，4℃最佳，反应最温和，背景较浅。37℃反应速度较快，时间较短。室温个人感觉不如前两者，条件不好控制。最常见的就是4度过夜这种。

3 回答9255 围观

问ELSA时酶与抗体交联，你们一般选择什么方法，郭春祥建立的HRP标记抗体的改良过碘酸钠法试过2次，效果一般，配方按照标准配的

bqejjh123

酶与抗体交联的方法有许多种，根据酶的结构不同可采用不同的方法。对于制备HRP结合物，可用戊二醛二步法和过碘酸钠发。尤以简易过碘酸钠法更为常用。

5 回答1603 围观

问肿瘤蛋白疫苗为什么要加强注射一针？

Kimser

疫苗的作用就是增加其含量，含量之所以少也是通过检测，原因在于消耗速率和起始浓度。

10 回答689 围观

问免疫组化染色检查是比较前沿的一种检查方法，可以用来判断肿瘤的早中晚期嘛？

Lv花开花落

肺癌的免疫组化染色检查是一种确诊肺癌类型的检查方法。肺癌的免疫组化分析可以帮助判断肺癌患者的具体病理类型。对于缺少组织形态学特征的肿瘤，主要依靠其免疫组化，作为重要的诊断依据，判断免疫组化染色为弥漫强阳性的标准为。

5 回答991 围观

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