师医生说
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1.首先要排除琼脂糖凝胶配制的是否正确,如果齿孔不规则或残余凝胶颗粒则会使条带不规则;2.检查电泳槽的电极是否出现移位、歪斜;3.考虑更换电泳缓冲液;4.电压不要太高,否则凝胶会受热。
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1、DNA降解:琼脂糖凝胶电泳试验中要避免核酸酶污染
2、电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多系使用后,离子强度降解,PH值上升,缓冲能力减弱,从而影响电泳实验,建议经常更换电泳缓冲液。
3、所用电泳条件不合适:电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃;巨大DNA链电泳,温度应该<15℃;检车所有电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力
4、DNA上扬量过多:应减少凝胶中DNA上样量。
5、DNA样含盐量过高:电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐。
有蛋白污染:电泳前酚抽提去除蛋白
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原因分析:DNA的上样量不够;DNA发生降解;
解决方法:增加上样量;防止DNA降解,例如,避免反复冻融样品、避免核酸酶的污染;