• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购

        免疫荧光背景太强怎么解决

        相关实验:B 淋巴细胞膜表面免疫球蛋白的检查实验

        user-title

        dxy_6779bc

        wx-share
        分享

        4 个回答

        user-title

        Kimser

        有帮助

        封闭不佳:封闭的目的就是为了减少非特异性的结合,减少背景染色。如果背景太强,可以考虑换种封闭液或者增加封闭孵育的时间。

        user-title

        dxywode

        有帮助

        背景色成因分两方面 一、组织切片因染色过程或组织非特异荧光而出现的背景色 二、拍照时因硬件设施或取景器设置而出现的背景色针对第一种问题有以下几点建议:1. 采用高品质的多聚甲醛固定减少普通甲醛的自发萤光 2. 切片厚度减薄 3. 切片贴片后流水冲洗干净减少杂质荧光 4. 一抗以及二抗漂洗干净!(非常重要) 5. 选用高品质封片介质针对第二种问题有以下几点建议:1. 曝光时间的控制 2. 暗室操作

        user-title

        小暮

        有帮助

        可能原因:

        1.一抗质量不高

        2.一抗浓度太高

        3.二抗浓度太高

        4.封闭不完全

        5.封闭液BSA中含IgG

        6.洗涤不充分

        优化方案(与以上原因相对应):

        1.使用特异性高,效价高的一抗

        2.同一样品按zui佳的二抗用量作一抗稀释曲线,以确定zui佳的一抗稀释比例

        3.同一样品按zui佳的一抗用量作二抗稀释曲线,以确定zui佳的二抗稀释比例

        4.使用二抗来源动物的非免疫血清进行封闭;改善封闭条件

        5.使用高纯度(IgG free)的BSA

        6.充分洗涤

        user-title

        府宅

        有帮助

        做一个不加一抗的对照试验,检测一下是不是二抗与切片发生了非特异性反应。

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序