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        IPTG诱导蛋白蛋白表达不出来

        相关实验:IPTG 诱导蛋白表达实验

        user-title

        dxy_cbomczd5

        重组质粒在BL21(DE3)中通过IPTG诱导表达不出来,但是测序结果是正确的,这种情况要重新做吗?

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        2 个回答

        user-title

        府宅

        有帮助

        建议可以尝试改用酵母或者昆虫细胞表达。甚至直接用哺乳细胞表达。

        如果一定要用BL21表达,我的建议是尝试用较低浓度IPTG在较低温度比如室温下表达更长时间,温和的表达条件运气好的话能稍微让蛋白质没那么容易misfold,不过不要抱太大希望。如果还是表达不出来,截短蛋白到70kDa左右。专注于一部分蛋白

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        大肠杆菌表达分子量超过100kDa的蛋白很难表达,蛋白质太大了原核生物很难表达,就算表达出来了也无法保证正确折叠,可能因错误折叠而聚集在insoluble fraction里。

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