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实验问答

28,263,188 科研人在看

问shRNA和siRNA区别？

dxy_gwrp7ndq

相比化学合成的siRNA，shRNA具有更多优点：稳定性高、脱靶率低、作用时间长和易导入困难细胞等shRNA和siRNA的区别：

3 回答15249 围观

问单细胞rna-seq测序的数据分析流程和bulk的rna-seq一样么。

dxy_gwrp7ndq

bulk的表达矩阵是reads比对到基因的数目；单细胞的表达矩阵是reads比对到某个细胞的某个基因的数目(barcode用来区分细胞；UMI用来区分转录本/基因)

1 回答1809 围观

问WB跑出来的条带很浅？但是样品已经很多了，该怎么办？

whilt-shirt

更换抗体，或者重新制备蛋白样本，提高样本浓度

2 回答851 围观

问SDS-PAGE电泳实验相关问题？

府宅

1.缓冲溶液、SDS都要新鲜配制。2.避免加样过多，提高分辨率。小体积样品可给出窄带，加样体积根据样品浓度和凝胶厚度灵活掌握。一般上样体积为10-15uL（即2-10ug蛋白质）。3.加热变性后的蛋白质样品要放置到室温即电泳，不要久放，因为蛋白质的二硫键在高温下可能是会断开，但是暴露于空气中温度降低会重新形成二硫键，而且可能在过久放置过程中蛋白质可能会再折叠，更不要扔到冰箱里保存。

4 回答1190 围观

问请问跑wb的一抗和二抗最多能重复用几次呢？如果配好了暂时先不用，放在-40℃冰箱能保存多久？

whilt-shirt

重复用的次数要视情况而定，常规的用10来次不成问题，配好的抗体一般在4℃条件下能保存2-3个月

3 回答7646 围观

问纯化好的蛋白怎么才能保持时间久一点？

府宅

短期保存（1周内）：对于短期保存，大多数蛋白可以保存在4 摄氏度下。4摄氏度下保存面临最大的问题是微生物的污染。因此，如果保存时间超过24小时，建议利用0.22 um的滤膜过滤样品，除菌后保存在无菌的管子中。值得注意的是，并不是所有的蛋白质都适合保存在4度下。长期保存：对于长期保存，冷冻是必须的。蛋白质溶液在速冻后可以在-20度或-80度中进行，-80度下的蛋白可以保存更长久。长期保存蛋白质的另一

2 回答3556 围观

问细胞提蛋白，有时候会出现胶状物，说明书说是正常现象，可以加点sds，但是加完依旧是胶状的，是什么原因？

whilt-shirt

换专用的提取试剂盒试试吧，这有可能是细胞数太多导致的

3 回答4606 围观

问加了PMSF，为什么曝光出来条带和内参效果一样呢？

whilt-shirt

PMSF是蛋白酶抑制剂，是防止蛋白降解的，对内参和目的蛋白不会有影响。目的蛋白和内参效果一样可能是一开始实验就出了问题

1 回答505 围观

问哪种方法能够很好的进行蛋白印迹分析

whilt-shirt

常规用的是Western Blot，条带图用Image J 进行灰度分析

1 回答478 围观

问抗原修复如果使用EDTA修复法，用多少浓度的EDTA呢？

菲菲飞呀飞

EDTA的最佳浓度为1.5mg/ml血液，如果血少，中性粒细胞会肿胀分叶消失，血小板会肿胀、崩解，产生正常血小板的碎片，使分析结果产生错误。

3 回答2200 围观

问抗原修复如果用高压热修复，具体要求和步骤是怎么样的？

菲菲飞呀飞

玻片要置于金属架上1)材料及试剂。家用不锈钢高压锅。加热板”玻片架放置容器(容量大约400 500ml)’抗原修复缓冲液(TivEDTA pH9.0,构橼酸钠pH 6.0)2)方法1.将合适的抗原修复缓冲液加入高压锅内，然后将锅置于加热板并开至最大功率，此时不要把盖子盖紧。在等待煮沸过程中，进行脱蜡至水。2.煮沸后，将玻片从自来水中取出放入高压锅内。小心热溶液-使用镊子。依照说明书加上加压阀。3.

3 回答2158 围观

问免疫科研入门者怎么才能设计好完整的实验？

菲菲飞呀飞

1、明确探究目的和已有条件，制定计划与设计实验的过程。2、尝试选择科学探究的方法及所需要的器材。3、尝试考虑影响问题的主要因素，有控制变量的初步意识。4、认识制定计划与设计实验在科学探究中的作用。注意：1、要明确实验目的，设计的方案要与猜想紧密相连，并且能够验证猜想是否正确。2、要选择合适的研究方法。一般常用的方法有控制变量法、转换法、现象或数据归纳法等。3、要根据需要列出实验器材设计实验步骤和记

3 回答680 围观

问蛋白质定量实验的注意事项有哪些？

Kimser

说一个才被老师说的事情，因为封闭时有点事情导致封闭时间过久，结果我的蛋白没有显色，，，本来以为问题不大，结果也不说啥都没有，但基本算是白做了。此外，一抗或者二抗的时间也需要安排好，最好是弄个定时器放旁边

4 回答931 围观

问淋巴细胞培养管的选择 24 48孔

菲菲飞呀飞

淋巴细胞培养既可选择培养板(24、48、96孔、培养瓶，也可选择三角烧瓶、试管等器■进行培养有研究表明提取的淋巴细胞用1. 5ml离心管培养72小时细胞生长状况良好细胞数与培养前比较,差异无统计学意义(P 20 05) .用青霉素小瓶进行培养淋巴细胞生长也非常好。可以认为,对散在的细胞培养来说用小器皿具有以下优点: (1)便于操作1.5ml离心管为次性使用，青称崇小瓶可反复刷洗，而培养板、培养瓶价

3 回答882 围观

问ACTIN为啥有两个条带？

DXY泡沫呀

有实验技术的原因，曝光的时候会有底片轻微移动的现象,出现很接近的两条

3 回答680 围观

问为什么WB显影后，有些位置没有条带，但内参上样量一致，重新转染后仍是没有，请问这是为什么，有什么解决办法吗？

小郭医生go

我的跑了都是质粒空载转染的没有出现目的条带，可能本身表达量就很低，或者你加大上样量试试看

3 回答715 围观

问做WB有什么要注意的吗

66QB1H

1.选择合适的分离胶浓度2.选择合适的电压、电流3.选择合适的一抗和二抗，并注意一抗二抗浓度和孵育条件（时间、温度等）3.洗脱时注意时间，太长太短都有影响4.配胶和转膜过程都要防止气泡

4 回答693 围观

问用dsRNA干扰后，应该根据什么选择检测干扰效果的实验呢？

小小袋袋

pcr测一测目标rna的表达情况，wb检测目标蛋白的表达情况，有改变后还可以考虑流式

3 回答765 围观

问为什么遗传物质就是核酸？

今天摆烂了咩

RNA是单链的，结构不稳定，一旦变异就没有对应的修复机制，而DNA的双螺旋结构可以很稳定的存在，复制。

4 回答1059 围观

问在跑wb时同一个蛋白在不同组织或细胞中显示出不同的条带，有的一条有的两条，出现这种情况的原因是什么？

whilt-shirt

有可能是抗体对不同组织的特异性导致的

3 回答954 围观

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