实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问nlrp3炎症小体激活后贴壁不牢，免疫荧光染色会冲掉怎么办？

府宅

洗的时候注意冲洗力度，如果吸头直接对着细胞并且吹打力度过大，的确能把细胞吸吹下来，尽量避免头直接对准细胞吧，建议贴着孔的侧壁加液体

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问想问一下大家有观察过PCMV6表达载体和PCDNA3.1表达载体的表达效率差异吗？大概有多少倍呀？

txs900416

这两个载体都是高拷贝载体，表达也都是CMV为启动子，差异不大啊

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问新型冠状病毒康复后会有自身免疫嘛？

dxywode

新型冠状病毒肺炎的患者恢复后体内产生了抗体，这些抗体的滴度随着时间的推移，也有可能会逐渐的减弱，甚至是消失。所以对于既往有新型冠状病毒肺炎的患者，仍然需要采取措施加强防护，预防再次出现感染。

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问免疫疫组化实验所用的组织和细胞标本有哪些

dxy_gwrp7ndq

主要为组织标本和细胞标本两大类，前者包括石蜡切片(病理大片和组织芯片)和冰冻切片，后者包括组织印片、细胞爬片和细胞涂片。

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问做实验需要的抗体如何制备？

府宅

抗体制备要点：1.这个抗体用来做什么实验(ELISA、IHC、Western Blot、IF或者IP等)?（功能性要求）2.是否已有商品化的抗体可以满足以上功能需求?（便利性要求）3.抗体需要什么种属来源（兔子、山羊、大鼠或小鼠等）?（抗体属性要求）4.需要多抗还是单抗?（品质性要求）；5.已具备的抗原信息或材料（抗原信息或材料：CDS序列，重组质粒，重组蛋白、多肽等）?（可能性要求）；6.是否可

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问动物组织的切片做免疫荧光出现非特异性染色的原因是什么？

Kimser

1，染色时间过长，2，抗体浓度过高，3，甚至有时候贪多嚼不烂，一次性做太多切片，出现组织变干的情况，

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问免疫共定位结果怎么分析？

君君子丶

不需要建立text,直接将网页上的代码ctrl+a(全选)→CTRL+C复制到剪切板就行。在image J 中Plugins→new→在打开的页面中ctrl+V→左上角 file→save as(保存在你能找到的地方就行) 再回去，Plugins→macros→install 找到你刚才保存的文件，打开即可。你就会发现image J下面多了右侧这个血管的图标。

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问请问大家用什么稀释一抗和二抗呀，脱脂奶粉，TBS，TBST有什么区别？如果条带不好看，怎么判断是不是一抗的问题呢？

txs900416

一般用5%bsa-tbst或5%脱脂奶粉-tbst孵育，tbs和tbst的区别在于tbst中多了一个t，即吐温20，Tween 20 是非离子型去污剂。因为western中所用的膜可以与蛋白质结合，这样的话孵育过程中，抗体是能够与膜非特异性结合的，为了防止以后曝光造成胶片背景太高，在孵育抗体后，混有Tween 20的PBS 能够将非特异性结合的抗体洗掉，增加特异性。看一抗有没有问题建议使用阳性对照

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问请问在wb实验中转膜后，发现所有的蛋白条带都在，只是颜色变淡了，有什么办法可以解决?

黎咖勒翟

转膜夹松动，下次多加一层滤纸。

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问请问如何对条带的结果定量能更贴近真是的表达量？定量时，不同泳道的蛋白需要用同样大小的圈吗？

dxywode

不能严格定量，只能互相比较。无论什么染色法，条带亮度会随着染液多少及染色时间的不同而变化，无法严格定量。 page的作用更多的是看目的条带的大小，以及两个样品中相同蛋白互相比较多少。不能精确算出是多少ug或ng。

1 回答91 围观

问免疫组化有什么意义，准确性如何？

梁总的贴身医生

①恶性肿瘤的诊断和鉴别。②确定转移性恶性肿瘤的原发部位，有些肿瘤在发现的时候已经有转移了，而我们却发现的是转移部位，而不是原发部位，这时候免疫组化就可以帮助我们找到肿瘤的原发部位。③对某类肿瘤进行病理分型。④明确软组织(如肌肉、韧带、骨膜、脂肪等)肿瘤的正确组织学分类，明确软组织的诊断，因其种类多、组织形态相像，有时难以区分其组织来源，应用多种标志进行免疫组化研究对软组织肿瘤的诊断是不可缺少的。⑤

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问免疫组化实验，切片厚度多少合适？

梁总的贴身医生

一般组织切多厚是依据实验目的而定的。一般大鼠大脑要做免疫组织化学的话，需要把细胞切开，抗体容易进到胞质（如果是胞核染色则需要进一步核膜打孔，跟细胞膜打孔一样，常用triton x-100），一般神经细胞的胞体的大小差异很大，小的直径仅5～6μm，大的可达100μm以上，结合文献会发现，经常切30um或者20um，这样可以切开多数的细胞

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问条带为什么跑不出来？

woazan

如果你的抗体没问题（别人跑出来了），那么就是降解的可能性大，蛋白酶磷酸酶抑制剂这些最好换个好的牌子，提取组织蛋白要超声，可以加大上样量与阳性对照

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问红色蛋白使用什么拷贝数的质粒可以更好的显色？

txs900416

取决于表达及细胞毒性之间的一个平衡，之前一些红色蛋白易形成多聚体且有细胞毒性，所以表达多的容易导致细胞死亡。后来经过改进这些红色荧光蛋白毒性都减弱了，一般来说对于稳转株拷贝数高低无所谓，对于瞬转还是建议用高拷贝质粒

1 回答286 围观

问Th10和Th17如何诱导？

bqejjh123

你可以分别采取以下3种方法体外诱导Th17细胞:①给予CD3及CD28抗体刺激,并在培养体系中加入白细胞介素6及转化生长因子β,培养3d.②在方法①的基础上加入白细胞介素1β及肿瘤坏死因子α,培养3d.③在方法②的基础上第3天洗去细胞因子,培养2d;再次给予CD3及CD28抗体刺激,并在培养体系中加入白细胞介素23,培养3d.

1 回答421 围观

问免疫共沉淀的方法更适用于检测哪种物质？对于样本需要怎么样的处理？新手应该注意哪些方面？需要用到的仪器是哪些？

Kimser

适用于：检测兴趣蛋白质，样本：需要加入细胞裂解缓冲液也就是蛋白酶抑制剂，新手注意：每种细胞裂解条件不同，如果没有人带你，可以做对照实验，还有就是注意不要用太多，多看看说明书要求，注意避免污染仪器：离心机，ep管，离心管，电泳仪，电泳槽，色谱仪，刮刀等

2 回答339 围观

问免疫荧光可以染两种抗体吗？

dxywode

当两个抗原都表达在胞浆中，行免疫组化双染时染色容易相互覆盖。此时可以用免疫荧光双染，当然可以在同张片子上进行，具体操作时先使用一种荧光进行着色后立即拍照，然后等荧光消失后再染另一种荧光染色，选择相同视野拍照，这样也有说服力的。

3 回答3316 围观

问做小鼠细胞因子测定实验后多久抽血比较好

txs900416

一般在损伤高峰测，比如Con A注射的小鼠，肝损伤在8-12h，这期间收是没问题的。测血清中细胞因子主要是要检测试剂盒的检测限足够灵敏，另外要每次设置阳性阴性对照，这样可以有效进行比较。

2 回答640 围观

问除了空气过滤系统，还有可靠的去除核酸污染清洁剂吗？

府宅

对可疑器用稀酸进行擦拭或浸泡，紫外线照射，对反应液用DNaseⅠ或内切酶进行处理等方法。

3 回答439 围观

问细胞RNA提取时trizol的量是多少？

dxy_za0jbge8

300μl细胞液＋700trizol

2 回答8942 围观

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