为什么WB显影后，有些位置没有条带，但内参上样量一致，重新转染后仍是没有，请问这是为什么，有什么解决办法吗？

我的跑了都是质粒空载转染的没有出现目的条带，可能本身表达量就很低，或者你加大上样量试试看

1.封闭时间过长，一般封闭一小时

2. 一抗一小时以上，然后4度过夜

1.目的、内参的分子量、膜的孔径，转膜电压及时间，这些都可能影响到条带。如果分子量小，膜孔径大，转膜电压高，时间长，有可能把小分子的蛋白转过。

2.还有一抗稀释度太大，试试减小稀释度，做个一抗梯度