抗原修复如果用高压热修复，具体要求和步骤是怎么样的？

玻片要置于金属架上

1)材料及试剂

。家用不锈钢高压锅

。加热板

”玻片架放置容器(容量大约400 500ml)

’抗原修复缓冲液(TivEDTA pH9.0,构橼酸钠pH 6.0)

2)方法

1.将合适的抗原修复缓冲液加入高压锅内，然后将锅置于加热板并开至最大功率，此时不要把盖子盖紧。在等待煮沸过程中，进行脱蜡至水。

2.煮沸后，将玻片从自来水中取出放入高压锅内。小心热溶液-使用镊子。依照说明书加上加压阀。

3.高压锅达到最大压力后，维持3分钟。

4.3分钟过后，关掉加热板，将高压锅取下放置。

5.打开高压锅阀门，冷水冷却锅身。压力降下后，打开锅盖，冷水冷却10分钟。

6.继续染色。

高压抗原修复法：①切片脱蜡至水。

②0.3%H2O2甲醇处理切片10分钟。

③自来水洗，蒸馏水洗。

④切片放入抗原修复液中，边同容器放入高压锅中加热至沸腾。盖上压力阀至喷汽后持续1-4分钟。

⑤待修复液恢复至室温后，PBS洗3次，随后按选好的免疫组织化学染色方法进行染色。

高压热修复：在沸水中加入EDTA（pH8.0）或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）。盖上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。