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        如何高效的向原代细胞转染SiRNA?转染试剂?转染时间?

        相关实验:RNA 干涉实验

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        烤肉前进

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        3 个回答

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        bqejjh123

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         选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验有很大影响,它直接影响实验的结论和结果,因此必须选择低毒性转染试剂,以观察转染试剂的毒性是否较低。有一个简单的方法,看转染的过程和要求,比如要求的细胞密度越大,说明毒性越大,

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        丁香粉猪猪

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        1.设计合成有效的siRNA RNAi的核心需要siRNA对相应mRNA进行有效的结合和作用。siRNA的设计合成首先很重要,优的设计可以用小的工作浓度取得满意的沉 默效果,减少副反应的发生。siRNA的设计可以通过检索,优先选用经过验证的siRNA或设计多对siRNA。需要强调的是,需要同时设置阴性对照以排 除非特异沉默现象和阳性对照以确认整个实验体系的有效性。 2.合成的siRNA注意纯度和工作浓度 siRNA的合成需要注意的是一定要选用高纯度的siRNA,siRNA的纯度直接关系到转染效率和沉默效率。siRNA的工作浓度和siRNA的设计、细胞种类、目标基因有关。建议一定进行相关的预实验优化各条件。 3.选择合适的siRNA转染试剂选择合适的siRNA转染试剂是的RNAi实验成功另一个关键。由于细胞毒性对siRNA实验有很大影响,它直接影响实验的结论和结果,因此必须选择低毒性转染试剂,以观察转染试剂的毒性是否较低。有一个简单的方法,看转染的过程和要求,比如要求的细胞密度越大,说明毒性越大,例如转染复合物容许和细胞孵育的时间越短,说明毒性越大。除了低毒性,好操作简便,例如有的转染试剂要求转染前换无血清培养基或低血清培养基,转染后又要有血清培养基。实际上,由于培养条件的频繁变化,可能会对细胞表达模式产生影响,对后续的mRNA和蛋白分析也同样产生影响,终影响实验的可靠性。

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        府宅

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        siRNA:lipofectamin2000为1:0.01-1:0.1(pmol:ul)一般情况下,此范围内都可获得高的转染效率。细胞在CO2培养箱中37℃温育24h-48h后,进行转染后的其它检测步骤。如果细胞株比较敏感,孵育4-6小时后,除去复合物,更换培养基。

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