怎样提高免疫发光实验的效率？

一、细胞密度

1、保证玻片上的细胞以单层细胞生长

2、细胞生长速度

3、保证爬片是无菌的

二、孵育抗体

1、一抗浓度过高；

2、一抗孵育之后洗涤不充分；

3、一抗特异性不高，这时候你要考虑这个蛋白是细胞本身就表达的还是转入的质粒表达的；

4、可以查一下抗体识别序列，看看是否有同源性的蛋白。

三、DAPI复染细胞核

四、封片

1、细胞固定和通透2、抗体特异性3、合适的抗体稀释比例

你说的是免疫荧光法检测样本的实验吧？你可以通过成比例的降低样本和试剂体积，来节省成本。可以将96孔板，改为384孔板。从而减小体积

细胞免疫荧光关键总结

1.清楚蛋白定位和预测蛋白表达；

2.细胞爬片时的密度；

3.一抗浓度和特异性好坏；

4.涉及到双标染色，切记要将两种蛋白的种属来源区分开，二抗的颜色也要区分开；

5.DAPI复染时间；

6.细胞免疫荧光最好不封片，新手很容易在最后一步功亏一篑；

7.如果要观察时间梯度的变化，尽量不用一次性观察好几个时间组，一次只观察1-2组，不会影响荧光效果。