qpcr实验每次平行的扩增曲线都相差很大，怎么解决？

1.保证样品融化完全，混匀，且用同一个白枪尖上样。2.保证qpcr mix和引物及水混匀良好。3.复孔之间上样后，高度一致，4.盖好膜，扩增完成后，复孔的高度还要一致，没有蒸发

先考虑是否加样误差，另外可以让同组的同学帮忙重复一遍试试，也有可能是引物和试剂的问题

CT 值过大 原因：试剂和体系问题：体系反应条件欠佳或其中掺杂抑制剂影响酶活性；基因丰度或模板量低；上机的 PCR 板子或八连管与设备机型不匹配。

应对方法：1.适当增加模板量、重新制备纯度更高的模板或使用稳定性较高的预混液以消除抑制剂的不良影响，更换与设备机型相符的实验耗材。2.查阅文献或使用相关设计软件，设计合理的引物，建议扩增产物长度不超过 300 bp。