实验问答

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问RNA的提取原理是什么？

小布丁瑶瑶

RnA提取原理：Trizol是一种总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速裂解细胞，抑制细胞释放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法进行提取组织或细胞中的RNA。

4 回答1341 围观

问免疫荧光染色实验中染料的选择。

做药鹏

尽量选择光谱重叠比较少的荧光基团进行组合，进行两个不同蛋白的共染色。标记好荧光的细胞片应今早观察，或者用封片剂封片后在4℃或者-20℃避光保存，以免因标记蛋白解离或荧光减弱，还可以利用免疫荧光专用细胞处理试剂进行预处理减少自发荧光或荧光信号的淬灭。

5 回答2806 围观

问RNA干扰技术可以用在哪些领域？

小布丁瑶瑶

RNA干扰技术可以用于包括鉴定基因功能、疾病治疗、植物病毒抗性研究在内的多项研究领域。

4 回答517 围观

问通过对引物进行预处理，但仍然存在异常(还是有杂质)，应该怎么办？

迟C迟

首先搞清楚是什么杂质？如果是不溶的杂质，可以通过离心沉淀等方法，上清的引物还能用。如果是溶解性杂质，建议重新订引物吧。

3 回答567 围观

问Wb实验中二抗的作用？

府宅

二抗用于检测细胞或组织样本中的蛋白表达。它与抗原特异性一抗结合，二抗可检测目标蛋白中的高度特异性氨基酸序列。二抗对一抗的指定区域或区域的特异性允许多个二抗与单一一抗结合，放大信号并增加检测敏感性。二抗保存的好可用2-3次。

3 回答11795 围观

问EDTA不小心弄到皮肤上，眼睛里，嘴里应该怎么办？

Kimser

EDTA用于福尔马林固定、石蜡包埋组织切片免疫组织化学染色前的抗原修复。虽然其ph是9，不过一般使用时都是稀释过的，所以危害不大，一旦进入眼睛或皮肤，先用大量流动自来水冲洗一段时间后再就医检查。注意防护，戴好手套和护目镜等，也可以换用柠檬酸缓冲液。

3 回答1358 围观

问用DEPC溶解的时候促溶温度在什么范围与样品类型有关吗？

dxy_gwrp7ndq

与样品类型无关，一般在室温下溶解就可以了

3 回答408 围观

问超声粉碎细胞时需不需要冰上操作，怎么样才能不让温度升得太高？

whilt-shirt

正常来说是需要的，但是不太好操作，一般都是超声5-10s放冰上，然后再超声

3 回答1062 围观

问跑磷酸化蛋白是不是不能用奶粉封闭啊？什么替代最好？

YLO6WJ

可以用脱脂奶粉封闭，5%BSA也可以

3 回答752 围观

问提出来的蛋白样品最多能保存多长时间呢？在什么条件下保存最好？

毛桃子啊

确定每个样品的浓度之后，可将其冻存于 -20 ℃ 或 -80 ℃（一年）以备后续使用。建议分装保存，避免反复冻融。

3 回答10949 围观

问跑磷酸化蛋白有什么要特别注意的吗？出来的条带不明显，几乎看不到。

staywalking

1.收集细胞在冰上，加入磷酸酶抑制剂。足量裂解液。2.超声样本，促进蛋白溶解。3.增加上样量到40ug.4.根据推荐的方法稀释抗体。5.洗膜 TBST 5分钟三次。6.确定总蛋白是否有表达。然后排查该位点磷酸化是否被诱导，是否在合适的检测窗内（多设时间段）。用成熟的诱导Model制备阳性对照，可能你的模型或者样本里这个位点就是没有被磷酸化。

3 回答329 围观

问RNA提取OD多少合适做逆转录？

whilt-shirt

一般选择在1.6-2.0之间，越接近2.0越好，浓度在500ng/ul左右

3 回答532 围观

问RNA片断如何修复？

迟C迟

噬菌体的 RNA 修复系统是人们发现的第一个 RNA 修复系统，用来修复宿主细胞抗病毒反应等导致的 RNA 损伤，其修复途径由 T4 多核苷酸激酶磷酸酶(Pnkp)和 RNA 连接酶 1(Rnl1)共同催化。

3 回答690 围观

问免疫组化标本保存用生理盐水还是甲醛?

迟C迟

甲醛和生理盐水都可以。如必须保存时，则应保持置4℃以下保存。一般细菌涂片或器官组织切片经固定后可保存1个月以上。

3 回答1107 围观

问对于靶基因的干扰实验，shRNA和siRNA该如何选择？

迟C迟

siRNA和shRNA之间进行选择时，要考虑的一个重要因素是实验时间的长短。 siRNA在细胞中瞬时表达的，通常在3-5天内进行检测，而shRNA可以通过病毒或质粒介导的转染保持稳定。

3 回答1424 围观

问大分子量蛋白（470kDa）如何快速转膜？

staywalking

Tris- Acetate gel电泳，低浓度甲醇冰水浴湿转。欲速则不达。

6 回答2817 围观

问蛋白质纯度分析的方法有哪些？

毛桃子啊

蛋白质纯度鉴定的方法包括有电泳法、基于层析技术的方法、免疫化学法、蛋白质化学结构分析法和超速离心法等。其中最常用的是电泳法和高效液相层析（即高效液相色谱，HPLC）。质谱法可以与上述方法相结合，实现目的蛋白质和其他蛋白质的精确鉴定。

3 回答2309 围观

问使用Invitrogen iBlot2应该怎么快速转膜？具体步骤

丁香粉猪猪

参考转膜:如何使用 Invitrogen iBlot 2转印系统7分钟快速干转】https://m.baidu.com/video/page?pd=video_page&nid=10074237698057605529&sign=6838240746659596356&word=%E4%BD%BF%E7%94%A8Invitrogen+iBlot2%E5%BA%94%E8

2 回答449 围观

问蛋白质定量测定，误差在什么范围内可以忽略不计？

丁香粉猪猪

蛋白含量测定，有好几种方法，你说的是什么方法不同的方法使用的仪器，要求条件，等等不一样，你让我怎么回答？比如：吸光光度法：UV280nm 测蛋白质溶液的吸收值，与标准蛋白对照，得出浓度。BCA法：Cu2+与蛋白质形成络合物，普通光线读取溶液表面“灰度”，得出浓度。

2 回答528 围观

问为什么我的pcr产物和载体连不上？

1882 围观

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