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        如何进行RNA的定量?

        相关实验:从果蝇胚胎中提取总 RNA 或 poIy(A) +RNA

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        dengshay001

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        4 个回答

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        上海欧易

        有帮助

        RNA定量最常用的方法是紫外分光光度计法,原理是核酸及其衍生物,核苷酸、核苷、嘌呤和嘧啶有吸收UV的性质,其吸收高峰在260nm波长处。测得未知浓度核酸溶液的A260nm值,即可计算出其中RNA或DNA的含量。将样品的吸光度乘以稀释倍数乘以40μgRNA / mL,基于公式可以进行目标样品的浓度的计算。当然,目前市面上的一些基于分光光度计法的核酸定量仪器(如Nanodrop)已经不需要我们自行基于公式进行计算了。

        虽然紫外分光光度计法被广泛采用,但并不意味着它的读数是准确而可靠的。紫外吸光度测量不具有选择性,无法区分DNA、RNA或蛋白质。而一些游离核苷酸或多余的盐离子也会影响检测的数值。此外,紫外分光光度计的灵敏度不足,无法完成低浓度DNA和RNA的精确定量。因此,对于一些微量的样本,以及对定量精确性要求较高的实验(如高通量测序)中,常常会用到Qubit定量。它采用荧光染料与特异的靶分子结合。只有当荧光染料与样本中的特异分子(DNA或RNA或蛋白质)结合时,才会发出荧光信号,从而大大提升了研究的准确性。

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        小布丁瑶瑶

        有帮助

        RNA定量可用紫外吸收法和定磷法测定,用地衣酚显色法测定RNA含量,二苯胺显色法测定DNA含量。

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        府宅

        有帮助

        直接用分光光度计测出吸光度,然后除以相应的系数

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        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        可以通过紫外分光光度计、荧光染色和 Agilent2100 生物分析仪对 RNA 样品进行定量和完整性的分析

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