背景杂质多，封闭液用了也效果不佳，有没有好的办法?

膜过度曝光， 以及不足的漂洗都会导致高背景。

将膜曝光的时间缩短. 同样的，不充分的漂洗只是需要将冲洗更加充分彻底.，漂洗用来去掉过量的抗体.

降低抗体的浓度：通常高浓度的抗体会导致高的背景. 因为抗体浓度太高了，整个膜会被抗体所包被。抗体可进行恰当漂洗或更低浓度的抗体。

高背景也会发生当使用的化学试剂和耗材不合适或质量很差.

封闭这一步还是比较关键的，封闭不好容易造成高背景。最常用的封闭也就是脱脂奶粉和BSA。

封闭条件根据自己的实验选择，一般为5%脱脂奶粉或1～3%BAS室温封闭2-4h，但最好4度过夜。判断封闭条件，要考虑在此条件下是否能达到实验要求。从成本上来说，脱脂奶粉是首选，脱脂奶粉封闭的背景较低，又很经济，大部分实验都可以选用脱脂奶粉，建议：先用脱脂奶粉，如果背景脏，就改为BSA。

封闭液的浓度也可以提前优化，过低或过高都会造成不好的影响。过低封闭浓度势必造成本底过高，但过高又会使灵敏度降低，因此只要选择能够满足你试验要求的最低浓度就可以了。另外提醒，洗涤一定要彻底，很重要的。

封闭是为了阻止PVDF膜与一抗的非特异性结合，避免杂带的出现或背景杂乱。在封闭过程中必然会损失血清蛋白，封闭液可以回收利用，-20度保存，但重复用多次后效果必然变差。封闭这一步还是比较关键的，封闭不好容易造成高背景，用量及封闭液体积在正常用量范围问题都不大，封闭的时间也可以适当延长。

如果用牛奶封闭的，可以考虑换用bsa封闭试试，如果实在不行，只能换公司重新买抗体。