wb实验中预制胶和梯度胶各有啥优缺点，如何选择?

预制胶只能分离其分离范围内的蛋白质，过大过小都不行，而梯度胶则不存在这种局限性，大分子在顶部分离，小分子在底部分离；由于梯度凝胶孔径逐步变小，在蛋白质不能通透的孔径附近对蛋白有浓缩作用，所以电泳后形成很窄的区带，可以分辨出分子量相差较小的蛋白质，而这类蛋白往往在固定胶无法完成分离。

预制胶优势：

1.电泳时间短，可支持150V电压，30-45min即可完成电泳过程

2.边缘效应弱，条带更平直；于 Tris - Glycine 体系， Bis - Tris 体系凝胶条带位置正确性更高。 不用自行配制，开袋即用，安全省事便捷

3.胶与胶间重复性好，质量稳定，避免手工灌胶的差异性

预制胶的优点：

1. 即开即用，不用再自行配制配胶所需溶液、灌胶、等胶凝固，节省您的宝贵的时间和精力；

2. 不用再接触丙烯酰~H甲叉丙烯酰，APS以及TEMED等几种具有积累性神经毒性的试剂；

3. 大规模生产，胶与胶之间重复性好，质量稳定，不像手工灌胶那样结果差异大。

梯度凝胶的优点：

1．梯度凝胶的分离范围更宽，可以同时分离较大范围分子量的蛋白质。单一凝胶电泳对于分子量超过其分离范围的蛋白质，过大或过小，都不能分离。而梯度凝胶孔径范围比单一凝胶大，分子量较大的蛋白质可以在凝胶顶部大孔径部分得到分离，而分子量较小的蛋白质可以在凝胶底部小孔径部分得到分离，所以分子量较大和较小的蛋白质可以同时得到分离。

2. 梯度凝胶可以分辨分子量相差较小，在单一浓度凝胶中不能分辨的蛋白质。蛋白质在梯度凝胶中迁移，经过的孔径越来越小，直到凝胶的孔径不能通透，这样电泳过程中蛋白质就被浓缩，集中在一个很窄的区带中。而分子量略小的蛋白质可以迁移得更靠前一些，被集中在略前面的区带中。由于梯度凝胶孔径逐步变小，在蛋白质不能通透的孔径附近对蛋白有浓缩作用，所以电泳后形成很窄的区带，可以分辨出分子量相差较小的蛋白质。对于太稀的样品，在电泳过程中可以将样品分几次加样，大小不同的蛋白质分子最终都会滞留在其相应的凝胶孔径中而得到分离。

3. 可以直接测定天然状态蛋白质的分子量而不需要解离为亚基，这一方法可以与SDS-PAGE测定分子量的方法互为补充。

预制胶可以是梯度胶也可以是单一浓度的胶，个人比较喜欢4-12%的梯度胶，可以把大蛋白和小蛋白都跑出来，且条带宽度足够。